[發明專利]肽片段的制備方法及該方法中使用的肽片段制備用試劑盒、以及分析方法

有效

• 申請號: 201380078545.8
• 申請日: 2013-09-09
• 公開（公告）號: CN105518447B
• 公開（公告）日: 2018-01-16
• 發明（設計）人: 島田崇史;深尾典子;青木智景;佐藤孝明
• 申請（專利權）人: 株式會社島津制作所
• 主分類號: G01N27/62
• 分類號: G01N27/62;G01N1/28
• 代理公司: 北京林達劉知識產權代理事務所(普通合伙)11277
• 代理人: 劉新宇,李茂家

1.一種肽片段的制備方法，其特征在于，具有如下步驟：

基質固定步驟，在多孔體的細孔內固定化切斷對象的基質蛋白；和

消化步驟，使固定化有基質蛋白的所述多孔體與在表面固定化有蛋白酶的微粒在液體中接觸，進行所述基質蛋白的蛋白酶消化，

所述微粒的平均粒徑大于所述多孔體的平均孔徑。

2.根據權利要求1所述的肽片段的制備方法，其中，在所述基質固定步驟中，所述基質蛋白的規定區域被固定化于所述多孔體上，與所述規定區域不同的區域位置選擇性地被蛋白酶消化。

3.根據權利要求1所述的肽片段的制備方法，其中，在所述多孔體的細孔內固定化有與所述基質蛋白進行位點特異性地相互作用的接頭分子，

在所述基質固定步驟中，所述基質蛋白借助所述接頭分子固定化在所述多孔體的細孔內。

4.根據權利要求3所述的肽片段的制備方法，其中，在所述基質固定步驟后，所述接頭分子與所述基質蛋白結合后的狀態的分子大小為所述多孔體的孔徑的0.5倍～1.5倍。

5.根據權利要求1～4中任一項所述的肽片段的制備方法，其中，所述微粒的表面被能夠與所述蛋白酶結合的間隔分子修飾，所述蛋白酶借助所述間隔分子固定化在所述微粒的表面。

6.根據權利要求1～4中任一項所述的肽片段的制備方法，其中，所述基質蛋白為抗體。

7.根據權利要求6所述的肽片段的制備方法，其中，所述抗體為單克隆抗體。

8.根據權利要求6所述的肽片段的制備方法，其中，在所述基質固定步驟中，在所述多孔體上固定化所述抗體的Fc結構域，

在所述消化步驟中，利用所述蛋白酶位置選擇性地切斷所述抗體的Fab結構域。

9.根據權利要求1～4中任一項所述的肽片段的制備方法，其中，所述蛋白酶為胰蛋白酶。

10.根據權利要求1～4中任一項所述的肽片段的制備方法，其中，所述多孔體的平均孔徑為30～150nm，所述微粒的平均粒徑為100nm以上。

11.一種肽片段制備用試劑盒，其特征在于，其用于權利要求1～10中任一項所述的方法，

其包含：具有能夠固定化基質蛋白的細孔的多孔體和能夠將蛋白酶固定化在表面的微粒，

所述微粒的平均粒徑大于所述多孔體的孔徑。

12.根據權利要求11所述的肽片段制備用試劑盒，其中，所述微粒以在表面固定化有蛋白酶的狀態提供。

13.一種分析方法，其利用質譜法對根據權利要求1～10中任一項所述的方法制備的肽片段進行分析。

14.根據權利要求13所述的分析方法，其中，分析對象的肽片段為含有抗體的互補性決定區的至少一部分氨基酸序列的肽片段。