[發明專利]具有提高的病毒生產能力的細胞系及其生產方法

有效

• 申請號: 201380075430.3
• 申請日: 2013-12-27
• 公開（公告）號: CN105121634B
• 公開（公告）日: 2019-07-26
• 發明（設計）人: 樸世鎬;李殷妃
• 申請（專利權）人: 易木農麥克斯有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/44;C12N15/38;C12N7/01
• 代理公司: 北京坤瑞律師事務所 11494
• 代理人: 陳桉

本發明涉及本發明涉及具有提高的病毒生產能力的細胞系及其制備方法，更具體地，涉及由于Bst?2(tetherin)基因的功能喪失而具有增加的病毒生產能力的細胞系及其生產方法。根據本發明，喪失Bst?2基因功能的細胞系相比于野生型細胞系具有優異的病毒生產能力。因此，當將該突變細胞系用作產病毒的細胞系時，可以提高病毒產率。此外，該突變細胞系可用于生產和研究用于預防和治療病毒性疾病的疫苗。

技術領域

本發明涉及具有提高的病毒生產能力的細胞系及其制備方法，更具體地，涉及由于Bst-2(tetherin)基因的功能喪失而具有提高的病毒生產能力的細胞系以及其生產方法。

背景技術

流感是一種由流感病毒感染呼吸道所引起的急性發熱性疾病。流感病毒根據它們的核心蛋白被分類為A、B和C型。A、B和C型流感的宿主之間在流行病學和臨床特點上有所不同。流感病毒是具有80-120nm直徑的球形病毒，并且基于病毒表面上的血凝素(HA)和神經氨酸酶(NA)糖蛋白的抗原性質被分成各種亞型。在A型流感的情況中，已經鑒定出16種HA亞型(H1至H16)和9種NA亞型(N1至N9)。因此，理論上存在144種A型流感病毒的亞型(例如，H1N1、H1N2等)(Treanor J.J.et al.,In Principles and Practice of InfectiousDiseases,2060-85,2005)。

流感疫苗包括滅活疫苗和活疫苗。滅活疫苗是通過純化在含胚卵中培養的病毒，并將培養的病毒用福爾馬林等滅活而產生的。滅活疫苗包括滅活的全病毒疫苗，通過用醚等破壞病毒包膜產生的裂解疫苗，通過純化血凝素和神經氨酸酶組分獲得的亞單位疫苗等。作為活疫苗，已經開發并使用活的減毒流感疫苗(LAIVs)。因為全病毒疫苗在嬰兒中引起副作用，這些疫苗在包括韓國在內的許多國家幾乎不使用，而僅在某些國家使用。然而，組分疫苗如裂解疫苗或亞單位疫苗是高度安全的并且具有公認的效果，因此被最頻繁地使用。另外，已開發出含有用于增強免疫反應的免疫佐劑(如MF-59)的疫苗，或形成病毒樣小泡的病毒體疫苗，并在一些國家中使用(Bridges C.B.et.al.,In Vaccines,259-290,2008；Belshe R.B.et.al.,In Vaccines,291-309,2008)。

到現在為止，為了生產用于產生抗流感疫苗的病毒，使用將種子病毒接種到受精卵中并培養接種病毒的方法(韓國專利公開號10-2012-0103737A)。但是，這種方法由于包括供應受精卵的安全性、過敏誘發和病毒傳播等問題而具有非常低的效率。為獲得用于疫苗生產的特異性無病原體的受精卵，應該在與外界完全隔離的無菌設施中，在不向雞施用抗生素和疫苗的狀態下飼養雞，并應從雞生產受精卵。所產生的無病原體的卵在孵化所孵化約10天，在這之后由注射器針頭或類似物將病毒接種到卵的胚胎或尿囊液。接種后培養接種病毒3天，然后回收培養的病毒并進行純化處理。在某些情況下將這種程序制備的病毒進行滅活工藝，然后向其中加入用于誘導有效的免疫應答的佐劑、穩定劑、防腐劑等，由此生產疫苗。將所生產的疫苗裝填到單個小瓶或注射器中，在這之后進行檢查、包裝和運輸。在日本腦炎病毒的情況下，除了使卵受精并培養以外，也將該病毒接種到乳鼠的大腦中。

在這種傳統的疫苗生產方法中，擴大生產設施很困難。例如，需要額外供給作為原料的受精卵，擴大使用受精卵的生產工藝，而對于這種供應，也應該擴大無病菌的養雞設施。因為在這些設施中飼養的雞免疫很弱，這些雞比一般的雞難以飼養，需要被徹底控制。因此，擴大這樣的設施在空間或經濟方面有許多限制。此外，當禽類傳染性疾病如禽流感(AI)或新城疫(ND)流行時，還有可能難以穩定地供給無病原體的卵。

在嘗試克服這種常規問題中，通過動物細胞培養來生產疫苗的方法很久前就受到關注(韓國專利公開號10-2012-0033334)。這些方法包括通過在無菌條件下培養大量動物細胞并用病毒感染培養的動物細胞來生產疫苗的方法，通過基因工程方法僅生產誘導抗體產生的抗原的方法，等。通過動物細胞培養來生產疫苗的方法的最大優點是可以擴大生產規模。具體而言，根據被用作用于疫苗生產原料的動物細胞的培養規模可以按需擴大生產規模。