[發(fā)明專利]通過質(zhì)譜法的C肽檢測

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201380073416.X
• 申請(qǐng)日: 2013-12-23
• 公開（公告）號(hào): CN105102977A
• 公開（公告）日: 2015-11-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: N·克拉克;Z·陳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 奎斯特診斷投資公司
• 主分類號(hào): G01N33/53
• 分類號(hào): G01N33/53
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 趙蓉民;陸惠中

相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用

本申請(qǐng)根據(jù)美國法典第35卷第102條(e)款規(guī)定要求于2012年12月26日提交的美國臨時(shí)申請(qǐng)序列號(hào)61/745,976的權(quán)益，其內(nèi)容通過引用整體并入本文。

發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及定量測量C肽。在具體方面，本發(fā)明涉及通過質(zhì)譜法定量測量C肽的方法。

發(fā)明背景

以下對(duì)本發(fā)明背景的描述被提供僅僅是作為幫助理解本發(fā)明，并不意在描述或構(gòu)成本發(fā)明的現(xiàn)有技術(shù)。

C肽是在從胰腺內(nèi)胞吞小泡釋放之前，作為胰島素原(通過裂解)轉(zhuǎn)化成胰島素的過程的部分而形成的肽。人C肽的摩爾質(zhì)量約為3020.3amu。

C肽與細(xì)胞表面的受體結(jié)合，并將引起刺激Na+、K+ATP酶和內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑激活。這些酶在2型糖尿病中都具有降低的活性。C肽也起著修復(fù)動(dòng)脈肌層的作用。

C肽水平而非胰島素通常在新診斷出患糖尿病的患者中測量，因?yàn)殚T靜脈中的胰島素濃度會(huì)比外周循環(huán)高2至10倍的范圍。肝臟從血漿中提取約一半的胰島素，但這會(huì)隨著受試者的營養(yǎng)狀況而變化。因此，C肽可以是比胰島素直接測量更加全面的胰島素狀態(tài)的指標(biāo)。1型糖尿病患者無法有效產(chǎn)生胰島素，因而將有下降的C肽水平，而2型糖尿病患者的C肽水平通常是正常的或甚至升高的。因此，C肽測量用于將1型糖尿病與2型糖尿病區(qū)分開。另外，當(dāng)在天然胰島素產(chǎn)生過程中形成C肽時(shí)，在經(jīng)受胰島素治療的患者中測量C肽可有助于確定患者正產(chǎn)生多少天然胰島素。

C肽測量還可用于確定患者是否可能具有與多發(fā)性內(nèi)分泌腫瘤綜合征相關(guān)的胃泌素瘤。存在胃泌素瘤的大量多發(fā)性內(nèi)分泌腫瘤綜合癥還包括胰腺腺瘤、甲狀旁腺腺瘤和垂體腺瘤。更高水平的C肽與胃泌素瘤的存在一起提示，除了胃之外的器官可攜帶腫瘤。C肽還可在疑似有胰島素濫用的患者和患多囊卵巢綜合征的婦女中進(jìn)行評(píng)估，以評(píng)估胰島素抗性的程度。

發(fā)明概述

本發(fā)明提供通過質(zhì)譜法測定樣品中C肽的存在或含量的方法。

本文呈現(xiàn)的一些實(shí)施方式利用串聯(lián)質(zhì)譜法。在這些實(shí)施方式的一些中，方法包括：(a)將疑似含C肽的樣品經(jīng)歷高效液相色譜法(HPLC)以得到C肽富集的部分；(b)將富集的C肽在適合產(chǎn)生質(zhì)譜法可檢測的一種或多種C肽離子的條件下經(jīng)歷電離源；(c)通過串聯(lián)質(zhì)譜法測定一種或多種C肽離子的量，其中所測定的離子包括具有質(zhì)荷比為1007.5±0.5的前體離子和選自具有由927.6±0.5、785.4±0.5和646.1±0.5組成的質(zhì)荷比的離子組的一種或多種碎片離子。在這些實(shí)施方式中，步驟(c)中所測定的一種或多種離子的量與樣品中C肽的量相關(guān)，例如，用于測定樣品中C肽的量。在一些實(shí)施方式中，HPLC是1-DHPLC。在一些實(shí)施方式中，選自927.6±0.5、785.4±0.5和646.1±0.5的兩種或多種碎片離子的量在步驟(c)中被測定。

在利用串聯(lián)質(zhì)譜法的其它實(shí)施方式中，方法包括：(a)將樣品經(jīng)歷1-D高效液相色譜法(1-DHPLC)以得到C肽富集的部分；(b)將C肽富集的部分在適合產(chǎn)生質(zhì)譜法可檢測的一種或多種C肽離子的條件下經(jīng)歷電離源；和(c)通過串聯(lián)質(zhì)譜法測定一種或多種C肽離子的量。在這些實(shí)施方式中，步驟(c)中所測定的離子的量與樣品中C肽的量相關(guān)。在一些實(shí)施方式中，步驟(c)中所測定的一種或多種離子包括質(zhì)荷比(m/z)為約1007.5±0.5的前體離子。在一些相關(guān)的實(shí)施方式中，步驟(c)中所測定的一種或多種離子進(jìn)一步包括選自具有質(zhì)荷比(m/z)為約927.6±0.5、785.4±0.5和646.1±0.5的離子組的一種或多種碎片離子。在一些相關(guān)的實(shí)施方式中，步驟(c)中所測定的一種或多種離子包括選自具有質(zhì)荷比(m/z)為約927.6±0.5、785.4±0.5和646.1±0.5的離子組的兩種或多種碎片離子。

在利用串聯(lián)質(zhì)譜法的實(shí)施方式中，串聯(lián)質(zhì)譜法可通過任何本領(lǐng)域已知的方法進(jìn)行，包括例如多反應(yīng)離子監(jiān)測、前體離子掃描或產(chǎn)物離子掃描。