[發明專利]高功能植入體材料

在審

• 申請號: 201380072455.8
• 申請日: 2013-12-26
• 公開（公告）號: CN104981547A
• 公開（公告）日: 2015-10-14
• 發明（設計）人: 上田實
• 申請（專利權）人: 石匠株式會社
• 主分類號: C12P21/00
• 分類號: C12P21/00;A61L27/00;C07K14/47;C07K14/475;C07K14/65;C07K14/78;C12N5/071;C12N15/09
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司 11127
• 代理人: 龐東成;李洋

技術領域

本發明涉及使用骨髓間質細胞(BMCs)或永生化乳牙干細胞的產生物的高功能植入體材料。更詳細地說，本發明涉及在表面涂覆有上述BMCs骨髓間質細胞或永生化乳牙干細胞的產生物的高功能植入體材料。

背景技術

牙科治療的目的之一在于使用人工材料來恢復缺損牙齒的功能和形狀。因此，為了補上缺損的牙齒等，作為最普遍的治療，使用植入體。

原本來說，為了使缺損的牙齒等發揮出充分的功能，需要使植入體穩定化，從而希望植入體與牙槽骨一體化。因此，作為這樣的植入體材料，使用了生物玻璃、磷酸鈣陶瓷(即羥基磷灰石和β-磷酸三鈣)、其它生物活性材料和金屬材料。

若從與骨一體化的方面考慮，則上述生物活性材料在生物體親和性高這一點上是優異的。另一方面，由于對牙齒要施加較大的力，因而若從強度、耐久性之類的機械特性的方面考慮，則金屬材料是優異的。于是，在這樣的金屬材料中，從生物體親和性和成本等方面考慮，廣泛使用鈦(以下稱為“Ti”)作為植入體材料。

作為提高植入體材料的表面特性的技術，有人提出了下述植入體，該植入體在表面能夠吸引選自由人間葉干細胞和成骨細胞組成的一組中的細胞、或者能夠吸引選自由牛血漿白蛋白、牛血清白蛋白(Fraction?V)和牛血清纖連蛋白組成的一組中的蛋白質，且在表面具有帶正電荷的金屬氧化物(下文中稱為“現有技術1”)。

另外，已知金屬植入體在骨中的一體化要依賴于骨的再生能力。于是，為了提高該在骨中的一體化能力，在植入體材料表面進行了骨形成試劑或生長因子的應用。在迄今為止的報告(下文中稱為“現有技術2”)中有人指出，在將多肽或細胞固定于利用粘多糖進行了涂覆的植入體上時，可改善移植后的骨融合和骨修復。

現有技術文獻

專利文獻

專利文獻1：日本專利公表2012-509750

專利文獻2：日本專利公表2004-531461

發明內容

發明所要解決的課題

若與未對金屬植入體材料表面進行處理的情況相比，則上述的現有技術在與骨的一體化方面有進步，從這方面考慮其是優異的。但是，若與使用生物體親和性高的生物活性材料的情況相比，則其具有與骨的一體化仍不充分的問題。

另外，在金屬植入體材料表面的處理中，按照首先進行對金屬植入體表面進行活化的前處理、其后利用骨形成試劑進行處理或者應用生長因子的步驟來進行，因而操作復雜。進而，在金屬植入體材料表面應用生長因子的情況下，固定于其表面的生長因子的保持期限會成為問題。這是由于，若在金屬植入體材料表面的保持期限比骨與金屬植入體材料的一體化所需要的時間短，則無法期待充分的一體化。

因此，對于可利用簡便的方法提高材料的表面特性、并且可使骨與金屬植入體材料在一定期間內充分達成一體化具有強烈的社會需求。

解決課題的手段

本發明是基于上述狀況而完成的。

即，本發明的第1方式涉及一種細胞生成物的制備方法，其具備下述工序：預備培養工序，在含有5～15％血清、50～150U/mL青霉素和50～150μg/mL鏈霉素的培養液中加入5×10³～5×10⁴個/mL骨髓間質細胞或永生化乳牙干細胞，在5％CO₂存在下于34～37.5℃進行預備培養；細胞分選工序，分選出具有特定形狀和粘附性的上述細胞；以及培養上清收集工序，對于通過上述分選工序分選出的細胞在與預備培養相同的條件下進行培養，對培養開始后40～56小時的培養上清進行收集。

此處，上述骨髓間質細胞優選由大鼠的大腿骨得到，永生化乳牙牙髓干細胞優選來源于選自由豬牙髓和人乳牙組成的組中的任意的細胞。上述細胞優選在37℃進行培養。

此外，上述細胞分選工序中的特定形狀優選為梭狀且為紡錘型。上述培養上清優選在培養開始后44～52小時進行收集、更優選在培養開始后48小時進行收集。

此處，上述培養液優選為選自由Dulbecco培養基、Iscove改良Dulbecco培養基、Ham’s?F12培養基、和RPMI1640培養基組成的組中的至少一種以上的培養基。此外，上述血清優選為選自由胎牛血清、牛血清、馬血清、人血清以及綿羊血清組成的組中的至少一種以上的血清。進而，上述培養液優選含有10％胎牛血清、100U/mL青霉素以及100μg/mL鏈霉素。