[發(fā)明專利]高功能植入體材料

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201380072455.8
• 申請日: 2013-12-26
• 公開（公告）號: CN104981547A
• 公開（公告）日: 2015-10-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 上田實(shí)
• 申請（專利權(quán)）人: 石匠株式會(huì)社
• 主分類號: C12P21/00
• 分類號: C12P21/00;A61L27/00;C07K14/47;C07K14/475;C07K14/65;C07K14/78;C12N5/071;C12N15/09
• 代理公司: 北京三友知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11127
• 代理人: 龐東成;李洋

1.一種細(xì)胞生成物的制備方法，其具備下述工序：

預(yù)備培養(yǎng)工序，在含有5～15％血清、50～150U/mL青霉素和50～150μg/mL鏈霉素的培養(yǎng)液中加入5×10³～5×10⁴個(gè)/mL骨髓間質(zhì)細(xì)胞或永生化乳牙干細(xì)胞，在5％CO₂存在下于34～37.5℃進(jìn)行預(yù)備培養(yǎng)；

細(xì)胞分選工序，分選出具有特定形狀和粘附性的所述細(xì)胞；以及

培養(yǎng)上清收集工序，對于通過所述分選工序分選出的細(xì)胞在與預(yù)備培養(yǎng)相同的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，對培養(yǎng)開始后40～56小時(shí)的培養(yǎng)上清進(jìn)行收集。

2.如權(quán)利要求1所述的細(xì)胞生成物的制備方法，其特征在于，所述骨髓間質(zhì)細(xì)胞來源于選自由大鼠的大腿骨、豬牙髓以及人乳牙組成的組中的任意細(xì)胞。

3.如權(quán)利要求2所述的細(xì)胞生成物的制備方法，其特征在于，將所述細(xì)胞在37℃進(jìn)行培養(yǎng)。

4.如權(quán)利要求3所述的細(xì)胞生成物的制備方法，其特征在于，所述特定形狀為梭狀且為紡錘型。

5.如權(quán)利要求1所述的細(xì)胞生成物的制備方法，其特征在于，對培養(yǎng)開始后44～52小時(shí)的所述培養(yǎng)上清進(jìn)行收集。

6.如權(quán)利要求5所述的細(xì)胞生成物的制備方法，其特征在于，對培養(yǎng)開始后48小時(shí)的所述培養(yǎng)上清進(jìn)行收集。

7.如權(quán)利要求1所述的細(xì)胞生成物的制備方法，其特征在于，所述培養(yǎng)液為選自由Dulbecco培養(yǎng)基、Iscove改良Dulbecco培養(yǎng)基、Ham’s?F12培養(yǎng)基和RPMI?1640培養(yǎng)基組成的組中的至少一種以上的培養(yǎng)基。

8.如權(quán)利要求7所述的細(xì)胞生成物的制備方法，其特征在于，所述血清為選自由胎牛血清、牛血清、馬血清、人血清以及綿羊血清組成的組中的至少一種以上的血清。

9.如權(quán)利要求1所述的細(xì)胞生成物的制備方法，其特征在于，所述培養(yǎng)液含有10％胎牛血清、100U/mL青霉素和100μg/mL鏈霉素。

10.如權(quán)利要求1～9的任一項(xiàng)所述的細(xì)胞生成物的制備方法，其進(jìn)一步具備下述工序：

沉淀物制備工序，進(jìn)行離心和乙醇沉淀處理來制備沉淀物；以及

冷凍干燥工序，對通過所述沉淀物制備工序得到的沉淀物進(jìn)行冷凍干燥。

11.一種細(xì)胞生成物，其通過權(quán)利要求1～10的任一項(xiàng)所述的方法來制備。

12.如權(quán)利要求11所述的細(xì)胞生成物，其特征在于，在所述培養(yǎng)上清中至少含有I型膠原蛋白(Col-I)、纖連蛋白、核心蛋白聚糖和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)。

13.如權(quán)利要求12所述的細(xì)胞生成物，其特征在于，在所述培養(yǎng)上清中進(jìn)一步含有胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白7、卵泡抑素相關(guān)蛋白、金屬蛋白酶抑制劑I、組織型血纖維蛋白溶酶原激活劑抑制劑、肌動(dòng)蛋白以及巰基氧化酶I。

14.如權(quán)利要求13所述的細(xì)胞生成物，其特征在于，在所述培養(yǎng)上清中進(jìn)一步含有SPARC、膠原蛋白α2(IV)鏈、β-2-微球蛋白、Rho?GTP酶激活蛋白18。

15.一種高功能植入體的制作方法，其特征在于，其具備下述工序：

清洗工序，利用有機(jī)溶劑清洗植入體材料的表面，制成清洗植入體材料；

浸漬工序，將所述清洗植入體材料在具有特定組成的第1鈣化溶液中在特定溫度下浸漬3～6小時(shí)，制成浸漬植入體材料；以及

處理工序，將所述浸漬植入體材料利用含有特定濃度的權(quán)利要求12～14的任一項(xiàng)所述的細(xì)胞生成物的第2鈣化溶液進(jìn)行2～5天培養(yǎng)處理。

16.如權(quán)利要求16所述的高功能植入體的制作方法，其特征在于，所述植入體材料由選自由鈦、氧化鋯、羥基磷灰石以及β-TCP組成的組中的任意材料形成。

17.如權(quán)利要求16所述的高功能植入體的制作方法，其特征在于，所述有機(jī)溶劑為丙酮與60～80％乙醇。