[發明專利]用于診斷和治療鉤端螺旋體病的方法和蛋白質抗原組合物

在審

• 申請號: 201380071694.1
• 申請日: 2013-12-12
• 公開（公告）號: CN104994870A
• 公開（公告）日: 2015-10-21
• 發明（設計）人: P·菲爾格納;梁小武;A·柯;小E·A·旺德
• 申請（專利權）人: 加利福尼亞大學董事會;因波特醫療股份有限公司;耶魯大學
• 主分類號: A61K39/02
• 分類號: A61K39/02;C07K14/20
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262
• 代理人: 陳建芳;閻娬斌

本申請要求于2012年12月12日提交的臨時申請號61/736391的優先權。這些和所有其它引用的外來材料的全部內容均以引用方式并入本文中。當以引用方式并入的參考文獻中的術語的定義或使用與本文提供的術語的定義不一致或相反時，以本文提供的該術語的定義為準。

技術領域

本發明的領域是用于診斷和治療各種病癥和疾病、特別是鉤端螺旋體病的組合物和方法。

背景技術

鉤端螺旋體病是由感染鉤端螺旋體屬(Leptospira)細菌而引起的廣泛的重大疾病。所述疾病由于人與受感染的家養動物或野生動物接觸或通過與它們的尿液接觸而傳播給人。眾多種動物物種可充當所述細菌的儲庫。因此，人鉤端螺旋體病經常被認為是最廣泛的動物傳染性疾病。傳統處于患鉤端螺旋體病的高風險的群體包括農夫、獸醫、軍事人員、礦工和處理污水的個體。然而，也已經觀察到不同的傳播模式。已經將鉤端螺旋體病的爆發與例如強調戶外活動的生態旅游和體育賽事的娛樂活動關聯。

患有鉤端螺旋體病的個體在所述疾病的早期階段顯示眾多種相對非特異性的臨床癥狀，包括發熱、頭痛、發冷和嚴重的肌肉疼痛，使得基于臨床發現的早期診斷變得困難。遺憾的是，5-15％的感染導致嚴重的多系統并發癥，包括黃疸、腎衰竭和出血。嚴重的鉤端螺旋體病具有5-40％的死亡率。與嚴重貧困相關的狀況已導致鉤端螺旋體病在巴西和其它國家市區的流行，且具有高死亡率。

不僅對于評估疾病的全球負擔，而且對于提供早期診斷來說，缺乏快速且可靠的現場護理(point-of-care)診斷測試都是主要障礙。當前的診斷測試主要依賴于結合鉤端螺旋體脂多糖(LPS)的抗體的檢測并且對于抗生素療法最有效的早期疾病是不靈敏的。

特別是在疾病的早期可治療時期，鉤端螺旋體病的診斷是困難的。目前，存在鉤端螺旋體屬的最直接證明是通過分離和培養或PCR。遺憾的是，細菌學分離是昂貴的過程，需要訓練有素的技術人員和專門的設施。在鉤端螺旋體病的情況下，鉤端螺旋體屬的敏感特性使這進一步復雜化，其需要使用非常新鮮的樣品。另外，所述生物體在培養中生長相對緩慢，得出結果需要數周。因此，PCR被證明是用于在樣品中鑒別鉤端螺旋體屬的更有用工具。然而，PCR方法仍然需要專門的設備和高技術水平來恰當地進行，并且盡管是靈敏的，但可能不足以定量評估鉤端螺旋體屬感染的時期。

鉤端螺旋體病還可以使用表征個體對所述生物體的免疫反應的血清學方法來診斷。目前用于鉤端螺旋體病的血清學診斷的參考方法是微量凝集測試(MAT)，其中對患者血清凝集培養的鉤端螺旋體屬的能力進行表征。遺憾的是，這種方法受限于需要培養用于測定的鉤端螺旋體屬和所述生物體的異質性。

已進行嘗試來鑒別和產生特定的鉤端螺旋體屬蛋白質或肽，其可用于診斷鉤端螺旋體病的傳統免疫測定(例如酶免疫測定或側向流測試)。例如，在歐洲專利號2205625B1(授予Chang)和美國專利申請號2012/0100143(授予Chang)中，公開了許多用于診斷和預防鉤端螺旋體病的鉤端螺旋體屬外膜蛋白(即LP?1454、LP?1118、LP?1939、MCEII、CADF-likel、CADF-like2、CADF-like3、Lp0022、Lpl499、Lp4337、Lp328、L21)和表面蛋白(即LigA和LigB)。類似地，美國專利號7,531,177(授予Nascimento等人)描述了使用表面相關蛋白質LpL53、OMPL55、OMPL16、OMPL31、OMPL15、OMPL20、LpL23、LpL22、OMPL17、OMPL30、OMPL27、OMPL21、OMPL22、MPL17、MPL21、OMPAL21、OMPL63、OMPL14、MPL36、MPL39、MPL40和MPL21作為用作免疫接種物質以及用于鉤端螺旋體屬的免疫學測定的抗原。然而，以所述方法預選潛在抗原將它們限定為鉤端螺旋體屬表面蛋白質，所述蛋白質雖然可被個體的免疫系統獲取，但可能不包括可用的靶標。