[發(fā)明專利]IBV、CSFV和NDV的高分辨熔解基因分型

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201380071551.0
• 申請日: 2013-12-17
• 公開（公告）號(hào): CN104995315A
• 公開（公告）日: 2015-10-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: J-C·奧多內(nèi);S·賈甘納坦
• 申請（專利權(quán)）人: 梅里亞股份有限公司;亞太特種營養(yǎng)私人有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專利商標(biāo)事務(wù)所 11038
• 代理人: 韓威威

1.表征IBV毒株的過程或方法，其包括以下步驟：

a)從IBV毒株產(chǎn)生IBV?cDNA；

b)在實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)中使所述cDNA暴露于包含正向引物和反向引物的引物對以產(chǎn)生擴(kuò)增子，其中所述引物對是對于IBV基因組的S1基因特異的；

c)在所述實(shí)時(shí)PCR后立即對包含所述擴(kuò)增子的雙鏈產(chǎn)物進(jìn)行高分辨熔解(HRM)曲線分析；以及

d)分析和比較所述HRM曲線，從而表征所述IBV毒株。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的過程或方法，其中引物對包含具有如SEQ?ID?NO:29中所示序列的正向引物和具有如SEQ?ID?NO:30中所示序列的反向引物。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述IBV毒株選自793/B株、Massachusetts株、QX-樣株、IBNC90株、D274株、Iowa株、Arkansas株、Holland?52株、Connecticut?46株、Beaudette?US株、California株、Jilin株、Holte株、HK株、D41株、DE072株、西班牙/92/35株和埃及/F/03株。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的過程或方法，還包括鑒定新IBV毒株的步驟，其中所述IBV毒株的S1序列不與一個(gè)或多個(gè)IBV?S1序列以約95％序列同一性對齊。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的過程或方法，還包括分離所述新IBV毒株的步驟。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的過程或方法，其中所述過程提供用于區(qū)分感染動(dòng)物和接種(DIVA)動(dòng)物的手段。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的過程或方法，其中所述過程還包括步驟：鑒定所述IBV毒株是否為疫苗型毒株或感染所述動(dòng)物的野生型毒株。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的過程或方法，其中所述實(shí)時(shí)PCR包括以下步驟：

a)在95℃初始變性3秒；

b)在95℃變性1分鐘；

c)在55℃復(fù)性1分鐘；

d)在72℃延伸1分鐘；

e)重復(fù)步驟b)-d)45次。

9.用于檢測IBV毒株的試劑盒，其包含：

a)引物對，所述引物對包含具有如SEQ?ID?NO:29中所示序列的正向引物和具有如SEQ?ID?NO:30中所示序列的反向引物；

b)描述進(jìn)行實(shí)時(shí)PCR的參數(shù)和條件的說明書。

10.用于HRM分析的分離的多核苷酸或引物，其具有如SEQ?ID?NO:29或SEQ?ID?NO:30中所示的序列。

11.表征CSFV毒株的過程或方法，其包括步驟：

a)從CSFV毒株產(chǎn)生CSFV?cDNA；

b)在實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)中使所述cDNA暴露于包含正向引物和反向引物的引物對以產(chǎn)生擴(kuò)增子，其中所述引物對是對于CSFV基因組的NS5B或3’NTR區(qū)特異的；

c)在所述實(shí)時(shí)PCR后立即對包含所述擴(kuò)增子的雙鏈產(chǎn)物進(jìn)行高分辨熔解(HRM)曲線分析；以及

d)分析和比較所述HRM曲線，從而表征所述CSFV毒株。

12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的過程或方法，其中所述引物對包含具有如SEQ?ID?NO:8中所示序列的正向引物和具有如SEQ?ID?NO:9中所示序列的反向引物。

13.根據(jù)權(quán)利要求11或12所述的過程或方法，其中所述CSFV毒株選自ALD株、中國株(C株)、GPE株(日本株)、C/HVRI株(來自中國，基因型1.1)、Riems株(來自中國)、Alfort?187株、Ames株、Margarita株、Baker株、紐約株、Purdue?115株、Paderborn株、Spreda株、Oregon株、Singer株、Osloss株、Moredun株和Frijters株。

14.根據(jù)權(quán)利要求11所述的過程或方法，還包括鑒定新CSFV毒株的步驟，其中所述CSFV毒株的NS5B或3’NTR序列不與一個(gè)或多個(gè)IBV?S1序列以約95％序列同一性對齊。

15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的過程或方法，還包括分離新CSFV毒株的步驟。