[發(fā)明專利]親水性重組蛋白的提取方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201380068462.0
• 申請(qǐng)日: 2013-12-18
• 公開（公告）號(hào): CN104884463B
• 公開（公告）日: 2018-09-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 大澤利昭;森田啟介
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 絲芭博株式會(huì)社
• 主分類號(hào): C07K1/14
• 分類號(hào): C07K1/14;C12P21/02;C07K14/435
• 代理公司: 永新專利商標(biāo)代理有限公司 72002
• 代理人: 王靈菇;白麗

本發(fā)明涉及一種親水性重組蛋白的提取方法，其為從表達(dá)親水性重組蛋白的宿主中提取親水性重組蛋白的方法，其包含：在上述表達(dá)親水性重組蛋白的宿主中添加溶解用溶劑，獲得宿主細(xì)胞的溶解物的溶解物獲取工序，和在通過(guò)上述溶解物獲取工序得到的上述宿主細(xì)胞的溶解物中添加稀釋用溶劑，然后從得到的稀釋液將不溶物分離，回收含有上述親水性重組蛋白的上清液的工序；其中，上述親水性重組蛋白的親水性指數(shù)為0以下，上述溶解用溶劑為非質(zhì)子性極性溶劑，上述稀釋用溶劑為水系溶劑。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及親水性重組蛋白的提取方法，詳細(xì)而言，本發(fā)明涉及從表達(dá)親水性指數(shù)(hydropathy index)為0以下的重組蛛絲蛋白等親水性重組蛋白的宿主中提取親水性重組蛋白的方法。

背景技術(shù)

近年來(lái)，利用基因重組技術(shù)將目標(biāo)外來(lái)基因?qū)氪竽c桿菌等宿主的細(xì)胞中、使目標(biāo)蛋白表達(dá)成為可能，利用該技術(shù)進(jìn)行了各種有用的重組蛋白的生產(chǎn)。蛛絲纖維是高強(qiáng)度和具有韌性的纖維，由于這樣的特性，蛛絲作為新型原料受到關(guān)注，利用基因重組技術(shù)進(jìn)行了使作為蛛絲原料的蛛絲蛋白在大腸桿菌等宿主細(xì)胞中的表達(dá)、回收。通常，使用大腸桿菌等宿主進(jìn)行重組蛋白的生產(chǎn)時(shí)，通過(guò)將菌體破壞來(lái)回收目標(biāo)蛋白。例如，專利文獻(xiàn)1中記載了從宿主細(xì)胞中回收重組蛛絲蛋白的方法。

現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)

專利文獻(xiàn)

專利文獻(xiàn)1：日本特表2004-503204號(hào)公報(bào)

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明所要解決的課題

專利文獻(xiàn)1中，通過(guò)使用甲酸、丙酸等有機(jī)酸使宿主細(xì)胞溶解來(lái)回收重組蛛絲蛋白，但當(dāng)使用甲酸、丙酸等有機(jī)酸時(shí)，存在對(duì)酸沒有耐受性的蛋白易于被分解的問題。

本發(fā)明為了解決上述以往的問題，提供一種能夠在不使用有機(jī)酸的情況下從表達(dá)親水性重組蛛絲蛋白等親水性重組蛋白的宿主中提取親水性重組蛋白的親水性重組蛋白的提取方法。

用于解決課題的手段

本發(fā)明涉及一種親水性重組蛋白的提取方法，其是從表達(dá)親水性重組蛋白的宿主中提取親水性重組蛋白的方法，其特征在于，其包含：向上述表達(dá)親水性重組蛋白的宿主中添加溶解用溶劑，獲得宿主細(xì)胞的溶解物的溶解物獲取工序，和向通過(guò)上述溶解物獲取工序獲得的上述宿主細(xì)胞的溶解物中添加稀釋用溶劑，然后從得到的稀釋液中將不溶物分離，從而將含有上述親水性重組蛋白的上清液回收的工序；其中，上述親水性重組蛋白的親水性指數(shù)為0以下，上述溶解用溶劑為非質(zhì)子性極性溶劑，上述稀釋用溶劑為水系溶劑。

本發(fā)明的親水性重組蛋白的提取方法中，上述溶解用溶劑優(yōu)選為不具有環(huán)狀結(jié)構(gòu)的非質(zhì)子性極性溶劑，偶極矩優(yōu)選為3.0D以上。上述溶解用溶劑更優(yōu)選為選自二甲基亞砜、N,N-二甲基甲酰胺、和N,N-二甲基乙酰胺中的一種以上的非質(zhì)子性極性溶劑。上述溶解用溶劑優(yōu)選為在上述非質(zhì)子性極性溶劑中添加無(wú)機(jī)鹽而成的溶劑。上述稀釋用溶劑優(yōu)選為選自(1)水、(2)水與乙醇的混合液和(3)水溶性緩沖液中的一種水系溶劑。上述溶解用溶劑相對(duì)于上述宿主的質(zhì)量以體積(mL)/質(zhì)量(g)比計(jì)優(yōu)選添加0.5倍以上，上述稀釋用溶劑相對(duì)于上述宿主細(xì)胞的溶解物以體積比計(jì)優(yōu)選添加0.5倍以上。上述親水性重組蛋白優(yōu)選為選自重組蛛絲蛋白、重組節(jié)肢彈性蛋白和重組膠原中的一種蛋白。

發(fā)明效果

根據(jù)本發(fā)明，通過(guò)使用非質(zhì)子性極性溶劑作為溶解用溶劑、使用水系溶劑作為稀釋用溶劑，用溶解用溶劑將表達(dá)親水性指數(shù)為0以下的親水性重組蛋白的宿主溶解，向得到的宿主細(xì)胞的溶解物中添加稀釋用溶劑進(jìn)行稀釋、將不溶物分離，回收上清液，從而能夠在不使用有機(jī)酸的情況下，簡(jiǎn)便且高效地從宿主提取親水性指數(shù)為0以下的親水性重組蛋白。