[發明專利]使用離子交換色譜來控制高甘露糖糖型的水平的方法

在審

• 申請號: 201380066603.5
• 申請日: 2013-12-18
• 公開（公告）號: CN105229498A
• 公開（公告）日: 2016-01-06
• 發明（設計）人: S·瑞簡德安;J·王
• 申請（專利權）人: 米迪繆尼有限公司
• 主分類號: G02B5/28
• 分類號: G02B5/28;C07K1/18
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陶家蓉;沈端

1.一種減少樣品中糖蛋白的高甘露糖糖型的量的方法，其中該樣品包括該糖蛋白的高甘露糖糖型和至少一種其他糖型，該方法包括：

(a)在允許該糖蛋白保留到離子交換柱上的條件下，將該樣品加載到該離子交換柱上；

(b)使洗脫緩沖液通過該離子交換柱，以便從該離子交換柱洗脫該糖蛋白；

(c)收集從該離子交換柱上洗脫并且包括該至少一種其他糖型的第一一種或多種級分；并且

(d)從該第一一種或多種級分排除第二一種或多種級分，其中該第二一種或多種級分在該第一一種或多種級分之前或之后從該離子交換柱洗脫并且包含該高甘露糖糖型，

其中相對于加載到該離子交換柱上之前該樣品中該高甘露糖糖型的量，在該第一一種或多種級分中該高甘露糖糖型的量減少。

2.如權利要求1所述的方法，其中該離子交換柱是陽離子交換柱，并且其中在包含該至少一種其他糖型的該第一一種或多種級分之后從該陽離子交換柱洗脫包含該高甘露糖糖型的該第二一種或多種級分。

3.如權利要求1所述的方法，其中該離子交換柱是陰離子交換柱，并且其中在包含該至少一種其他糖型的該第一一種或多種級分之前從該陰離子交換柱洗脫包含該高甘露糖糖型的該第二一種或多種級分。

4.如權利要求1所述的方法，進一步包括測量在該第一一種或多種級分或該第二一種或多種級分中該高甘露糖糖型的量的步驟。

5.如權利要求1-4中任一項所述的方法，其中該糖蛋白是單克隆抗體。

6.如權利要求5中任一項所述的方法，其中該單克隆抗體是IgG抗體。

7.如權利要求5中任一項所述的方法，其中該單克隆抗體是IgG2抗體。

8.如權利要求5-7中任一項所述的方法，其中該單克隆抗體是重組單克隆抗體。

9.如權利要求8所述的方法，其中該重組單克隆抗體是從宿主細胞制備，其中該宿主細胞是細菌細胞、酵母細胞、昆蟲細胞、或哺乳動物細胞。

10.如權利要求5-9中任一項所述的方法，其中該單克隆抗體是人類抗體。

11.如權利要求5-10中任一項所述的方法，其中該單克隆抗體包括Fc區上的至少一個N-聯糖基化位點和Fab區上的至少一個N-聯糖基化位點。

12.如權利要求5-11中任一項所述的方法，其中該單克隆抗體的高甘露糖糖型是該單克隆抗體的高甘露糖5糖型。

13.如權利要求5-12中任一項所述的方法，其中該單克隆抗體包括具有氨基酸序列SEQIDNO:5的重鏈多肽和具有氨基酸序列SEQIDNO:6的輕鏈多肽。

14.如權利要求5-12中任一項所述的方法，其中該單克隆抗體包括重鏈多肽和輕鏈多肽，其中該重鏈多肽包括具有氨基酸序列(SEQIDNO:19)的重鏈互補決定區(CDR)1、具有氨基酸序列(SEQIDNO:20)的重鏈CDR2、以及具有氨基酸序列(SEQIDNO:21)的重鏈CDR3，并且其中該輕鏈多肽包括具有氨基酸序列(SEQIDNO:22)的輕鏈CDR1、具有氨基酸序列(SEQIDNO:23)的輕鏈CDR2、以及具有氨基酸序列(SEQIDNO:24)的輕鏈CDR3。

15.如權利要求5-14中任一項所述的方法，其中在該第一一種或多種級分中該單克隆抗體的高甘露糖糖型的量小于單克隆抗體的總量的2％。

16.如權利要求5-14中任一項所述的方法，其中相對于加載到該離子交換柱上之前該樣品中該單克隆抗體的高甘露糖糖型的量，在該第一一種或多種級分中該單克隆抗體的高甘露糖糖型的量減少了10倍。

17.如權利要求1-16中任一項所述的方法，進一步包括在加載該樣品之后并且在使該洗脫緩沖液通過該離子交換柱之前洗滌該離子交換柱的步驟。

18.一種包括單克隆抗體的組合物，其中該單克隆抗體包括至少兩個N-聯寡糖，并且其中在該組合物中，小于2％的該單克隆抗體是高甘露糖糖型。

19.如權利要求18所述的組合物，其中在該組合物中，小于1％的該單克隆抗體是高甘露糖糖型。