[發明專利]Salipro顆粒

在審

• 申請號: 201380066602.0
• 申請日: 2013-12-12
• 公開（公告）號: CN105188672A
• 公開（公告）日: 2015-12-23
• 發明（設計）人: 延斯·弗勞恩菲爾德
• 申請（專利權）人: 延斯·弗勞恩菲爾德
• 主分類號: A61K9/127
• 分類號: A61K9/127;A61K9/51
• 代理公司: 北京天昊聯合知識產權代理有限公司 11112
• 代理人: 王靜;丁業平

技術領域

本發明涉及脂蛋白顆粒，其用作疏水試劑(如疏水性藥物或膜蛋白)的遞送或載體系統，本發明還涉及用于制備該盤狀脂蛋白的方法。

背景技術

膜蛋白和疏水性的化合物非常難以處理，并且制藥和生命科學研究和應用中具有兩個主要的挑戰：(i)為不可溶的疏水化合物或膜蛋白提供在水溶液中的可溶性，以及(ii)將這類疏水性物質作為治療劑和診斷劑施用。

膜蛋白由全部ORF的大約30％編碼(參見文獻“WallinandvonHeijne,ProteinScience1998Apr；7(4):1029-38”)，并且由于大部分(即，大于60％)藥物實際上靶向這類蛋白，因此其代表了一類重要的藥物靶點(參見文獻“Overingtonetal.,NatureReviewsDrugDiscovery5,993-996(December2006)”)。膜蛋白在許多生物過程中發揮重要作用，如信號轉導、分子和能量運輸、識別和細胞通訊。然而，當將膜蛋白從其天然脂雙層環境中提取出來后，膜蛋白由于其不溶性和趨于聚集的性質而難以研究。為了維持膜蛋白的完整性，需要人造的疏水環境。在此，去垢劑膠束是最常使用的，然而其會對生物相容性產生負作用，能夠對膜蛋白的活性產生不利影響，并且可能會干擾檢驗的實驗條件。

另一個主要的藥理學挑戰是，施用和遞送疏水性化合物和/或疏水性蛋白作為治療劑或診斷劑。由于這些疏水性試劑的溶解度有限，它們趨于聚集，這將導致局部藥物顆粒濃度高，從而會導致高的毒性、不希望的免疫反應，并且會使藥物失活(參見文獻“AllenandCullis,SCIENCE,303(5665):1818-1822,MAR19,2004”)。

因此，非常需要將諸如膜蛋白、藥物或診斷化合物等疏水試劑納入可溶性的顆粒中的應用。目前，解決這兩個挑戰的方法主要涉及脂質體和重組高密度脂蛋白(rHDL)顆粒(參見文獻“ChanandBoxer,CurrentOpinioninchemicalBiology11:1-7,2007”)。

EP1596828B1公開了盤狀生物活性試劑運送顆粒，包含以雙帶樣形式緊密包圍脂雙層的載脂蛋白。上述顆粒的內部由脂雙層的疏水區域形成。這與具有含水內部的封閉球狀雙層殼的脂質體不同。EP1596828B1中公開的盤狀生物活性試劑運送顆粒的斯托克斯直徑約為10nm，并且提出了將其用作疏水性藥物如兩性霉素B或喜樹堿的遞送載體。

EP1345959B1公開了相似類型的直徑約10nm、高度約5.5nm的納米顆粒。該顆粒為盤狀，并且由(i)人工膜腳手架蛋白、(ii)磷脂雙分子層和(iii)至少一種疏水性或部分疏水性膜蛋白組成。所述膜腳手架蛋白也以雙帶樣式包圍脂雙層，并且是人載脂蛋白A-1的衍生物或截短形式，缺少人載脂蛋白A-1的N-末端球狀結構域，其是兩親性的并且形成至少一個α螺旋，并且在水環境中會與磷脂或磷脂的混合物自組裝成所述盤狀的納米顆粒。這種工程化的膜腳手架蛋白(MSP)將為納米級盤狀脂蛋白顆粒提供穩定性、尺寸均勻性以及有用的功能性。

然而，目前可用的納米盤技術存在一些缺點，例如，在顆粒的組裝過程中需要去除去垢劑。除此之外，在現有技術的方法中，由載脂蛋白衍生的MSP的緊密雙帶樣形式提供的尺寸均勻性似乎導致了這樣的代價：固定的最小顆粒尺寸，和限制了可獲得的最大直徑。

鞘脂激活蛋白(saposin)家族包括4種小(大約80個氨基酸)蛋白，包括鞘脂激活蛋白A到D，其與脂結合和/或相互作用，并且在鞘脂代謝中作為一些溶酶體酶的重要輔因子(參見“Bruhn,BiochemJ.(2005)389,249-257”和其所引用的文獻)。據描述，鞘脂激活蛋白更偏好帶負電荷的脂質和低pH值，在酸性pH環境中顯示出明顯提高的活性，最佳pH值為溶酶體內4.75的pH值。鞘脂激活蛋白A、B、C和D由單一的大的前體蛋白鞘脂激活蛋白原(prosaposin)通過蛋白水解作用水解而得。已經報道了鞘脂激活蛋白A、B、C和D的完整氨基酸序列、以及鞘脂激活蛋白原的基因組結構和cDNA序列(請參見“O'Brienetal.(1988)Science241,1098-1101；Furst等(1992)BiochimBiophysActa1126:1-16”)。