[發明專利]生產除草劑-抗性甜菜植物的方法

有效

• 申請號: 201380065688.5
• 申請日: 2013-12-13
• 公開（公告）號: CN105209622B
• 公開（公告）日: 2018-08-10
• 發明（設計）人: 居伊·魏恩斯;馬克·勒菲弗;呂迪格·海因;格哈德·約翰
• 申請（專利權）人: 西斯凡德爾哈維公眾公司
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H3/04;A01H4/00;A01H5/06;A01H6/02
• 代理公司: 北京康信知識產權代理有限責任公司 11240
• 代理人: 沈敬亭;李海霞

1.一種生產對乙酰羥酸合成酶(ALS)的一種或多種抑制劑有抗性的突變甜菜植物的方法，包括以下步驟：

-從分離自甜菜植物的氣孔保衛細胞中獲得原生質體；

-向所述原生質體的體外培養物施加組合物，所述組合物包含一種或多種以下濃度的ALS抑制劑，所述濃度對于大于99％的體外培養細胞是致死的；以及

-從所述體外培養細胞中的存活細胞再生甜菜植物，

其中，所述氣孔保衛細胞原生質體針對它們再生為甜菜植物的能力加以預先選擇，并且其中，向大于20000000的所述原生質體施加所述ALS抑制劑，其中所述原生質體具有大于10％的概率分裂和再生成存活的甜菜愈傷組織，所述大于10％的概率是指生長的原生質體數：投入培養的總原生質體數之比大于10％，其中通過所述原生質體獲得的愈傷組織具有大于10％的發芽的能力，所述大于10％的發芽的能力是指產生芽的愈傷組織數：總愈傷組織數之比大于10％。

2.根據權利要求1所述的方法，其中，選擇能夠再生為甜菜植物的氣孔保衛細胞原生質體的步驟，包括以下子步驟：分離來自于不同基因型的甜菜植物的氣孔保衛細胞原生質體，以及針對每種基因型測定當將所述原生質體投入體外培養時進行生長的所述原生質體的比例。

3.根據權利要求1或2所述的方法，進一步包括以下步驟：測序來自于存活的所述體外培養細胞的再生植物的基因組。

4.根據權利要求1或2所述的方法，進一步包括以下步驟：測序ALS基因用于識別所述ALS基因中的突變。

5.根據權利要求1或2所述的方法，進一步包括以下步驟：選擇在ALS基因中具有突變的再生甜菜植物。

6.根據權利要求1或2所述的方法，包括推導濃度的預備步驟，在所述濃度下，包含所述一種或多種ALS抑制劑的所述組合物對于至少99％的所述體外培養細胞是致死的。

7.根據權利要求1或2所述的方法，其中，將所述一種或多種ALS抑制劑施加于大于50000000的氣孔保衛細胞原生質體的體外培養物。

8.根據權利要求1或2所述的方法，其中，包含一種或多種ALS抑制劑的所述組合物包含甲酰胺磺隆。

9.根據權利要求8所述的方法，其中，在10^-9mol/L至10^-6mol/L范圍的濃度下施加所述甲酰胺磺隆。

10.根據權利要求1或2所述的方法，其中，包含一種或多種ALS抑制劑的所述組合物包含乙氧嘧磺隆。

11.一種生產對除草劑有抗性的突變甜菜植物的方法，包括以下步驟：

-從分離自甜菜植物的氣孔保衛細胞中獲得原生質體；

-向所述原生質體的體外培養物施加組合物，所述組合物包含以下濃度的所述除草劑，所述濃度對于大于99％的體外培養細胞是致死的；

-從所述體外培養細胞中的存活細胞再生甜菜植物；以及

-選擇在編碼所述除草劑靶向的肽的基因中具有突變的再生甜菜植物，

其中，所述氣孔保衛細胞原生質體針對它們再生為甜菜植物的能力加以預先選擇，并且其中，向大于20000000的所述原生質體施加所述除草劑，其中所述原生質體具有大于10％的概率分裂和再生成存活的甜菜愈傷組織，所述大于10％的概率是指生長的原生質體數：投入培養的總原生質體數之比大于10％，其中通過所述原生質體獲得的愈傷組織具有大于10％的發芽的能力，所述大于10％的發芽的能力是指產生芽的愈傷組織數：總愈傷組織數之比大于10％。