[發明專利]用于HPV誘導的浸潤性癌癥及其高度前期病變的分子診斷標志物PRDM14和FAM19A4

在審

• 申請號: 201380065250.7
• 申請日: 2013-10-14
• 公開（公告）號: CN104870653A
• 公開（公告）日: 2015-08-26
• 發明（設計）人: 克里斯托福魯斯·約安內斯·蘭伯特斯·馬里亞·梅熱爾;彼特魯斯·約瑟夫斯·費迪南杜斯·斯尼德斯;倫斯克·達妮埃拉·馬里亞·施滕貝爾根
• 申請（專利權）人: 塞爾夫斯庫林有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京德琦知識產權代理有限公司 11018
• 代理人: 康泉;王珍仙

1.用于檢測HPV誘導的高度癌前病變和HPV誘導的浸潤性癌癥的方法，所述方法包括檢測細胞中PRDM14和/或FAM19A4基因中的超甲基化，而這樣的超甲基化表明存在具有浸潤潛力的HPV誘導的前期病變和/或HPV誘導的浸潤性癌癥。

2.根據權利要求1所述的方法，其中，所述HPV誘導的高度癌前病變或HPV誘導的浸潤性癌癥為高度宮頸癌前病變或浸潤性宮頸癌。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其中，所述HPV誘導的浸潤性癌癥為高風險HPV誘導的浸潤性癌癥。

4.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中，所述FAM19A4的超甲基化表明存在晚期CIN3病變。

5.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中，額外檢測hsa-miR124-2的超甲基化。

6.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中，在如圖1和圖2所示的富CpG的序列中檢測所述超甲基化。

7.根據權利要求1至6中任一項所述的用于檢測HPV誘導的高度癌前病變或HPV誘導的浸潤性癌的方法，其中，所述超甲基化是與相當的正常細胞相比，測試細胞中PRDM14和/或FAM19A4的富CpG啟動子和/或基因組序列的甲基化增加。

8.根據權利要求1至7中任一項所述的方法，其中，所述試劑為甲基化敏感的限制性內切酶，選自由BssHII、MspI、NotI和HpaII組成的組中。

9.根據權利要求1至7中任一項所述的方法，其中，進行甲基化特異性PCR，所述甲基化特異性PCR基于DNA的亞硫酸氫鹽修飾，隨后進行靶向富CpG序列的特異性PCR反應。

10.根據權利要求9所述的方法，其中，使用結合于圖1中所示的核酸序列PRDM14或結合于圖2中所示的序列FAM19A4的核酸探針或引物。

11.根據權利要求10所述的方法，其中，所述核酸探針或引物具有可檢測標簽。

12.根據權利要求8、9或10所述的方法，其中，所述核酸探針具有選自由以下組成的組中的核苷酸序列：

a)在嚴苛條件下能夠雜交至圖1中所示的序列PRDM14或圖2中所示的序列FAM19A4的多核苷酸序列；

b)與a)的所述多核苷酸具有至少70％同一性的多核苷酸；

c)與a)的所述多核苷酸互補的多核苷酸；以及

d)包含a)或b)的核苷酸的至少15個堿基的多核苷酸。

13.根據權利要求1至12中任一項所述的方法，其中，確定所述PRDM14和所述FAM19A4基因的甲基化。

14.PRDM14和/或FAM19A4作為分子診斷標志物在檢測HPV誘導的高度癌前病變或HPV誘導的浸潤性癌中的用途。

15.根據權利要求14所述的用途，其中，所述標志物的甲基化能夠預測所述病變或癌的發生。

16.根據權利要求14所述的用途，其中，利用FAM19A4作為分子診斷標志物來檢測晚期CIN3病變。

17.在檢測HPV誘導的高度癌前病變或HPV誘導的浸潤性癌的方法中使用的套裝試劑盒，所述試劑盒包含：

-用于檢測PRDM14和/或FAM19A4甲基化的裝置，其中所述裝置包含對于圖1的PRDM14核苷酸序列和/或圖2的FAM19A4核苷酸序列具有特異性的探針和/或引物，

-用于檢測HPV感染的裝置，其中所述裝置包含對HPV具有特異性的探針和引物。

18.根據權利要求16所述的套裝試劑盒，其中，所述試劑盒額外包含用于檢測hsa-miR124-2甲基化的裝置。