[發明專利]血小板凝集能力的綜合評價方法

有效

• 申請號: 201380065229.7
• 申請日: 2013-12-20
• 公開（公告）號: CN104871005A
• 公開（公告）日: 2015-08-26
• 發明（設計）人: 細川和也;和田朋子;長谷川喬彬
• 申請（專利權）人: 藤森工業株式會社
• 主分類號: G01N33/86
• 分類號: G01N33/86;G01N33/49;G01N37/00
• 代理公司: 北京信慧永光知識產權代理有限責任公司 11290
• 代理人: 張淑珍;王維玉

技術領域

本發明有關研究血小板凝集能力的方法和檢査裝置，更詳細地說，本發明有關用于進行血小板凝集能力和形成的凝集塊的穩定性和持續性的綜合評價方法及其所使用的裝置：將與血小板活化試劑混合的血液使用泵從容器壓出后通過過濾器，由此時壓力變化的積分值來綜合評價血小板凝集能力和形成的凝集塊的穩定性和持續性。

背景技術

(血小板凝集檢査的現有技術的問題)

在動脈中血栓形成(白色血栓)中或在初級止血中，血小板的活化和凝集起到核心作用。

血小板在血管受到傷害的情況下，與在血管內皮細胞下存在的膠原蛋白直接地、間接地結合。在血流緩慢的環境下(過低應力下)，以與糖蛋白VI(GPVI)等膠原蛋白受體直接結合為主；在血流快速的環境下(過高應力下)，血管性血友病因子(vWF)與膠原蛋白結合，通過vWF與血小板的糖蛋白Ibα(GPIbα)受體結合，間接地與膠原蛋白結合。與膠原蛋白直接的、間接的相互作用使血小板活化，通過該刺激使腺苷二磷酸(ADP)、血清素等各種各樣的血小板活化物質從致密顆粒和α顆粒釋放。

這些釋放的血小板活化因子將自身的血小板和周圍的血小板活化。

受到活化的血小板受到纖維蛋白原受體GPIIbIIIa向活化型的構造變化的影響，變為對纖維蛋白原的高親和型。活化的血小板借助于二聚體纖維蛋白原被逐個交聯，形成血小板凝集塊。

以往主要利用光透過法進行血小板凝集能力的測定。在該方法中，將從血液分離的富血小板血漿(以下稱PRP)與血小板活化試劑混合，通過血小板凝集的濁度相對于時間的變化(降低)作成凝集率曲線(例如，專利文獻1)。

另外，由于從血液制備PRP麻煩，為了更簡便地測定血小板凝集，有人提議可以使用全血進行測定的血小板凝集測定裝置。作為主要的裝置，是將全血和血小板活化物質混合后，測定血小板的粘附/凝集導致的浸漬在血液中的電極的電阻變化的裝置(例如，非專利文獻1、2)。

另外，也有報告以下方法：將與多種濃度的血小板活化試劑混合后的血液靜置數分鐘使其反應后，通過吸引使之通過濾網，通過吸引壓力確定血小板活化試劑的臨界值，確定血小板凝集能力的正常與異常(專利文獻2、專利文獻3)。該方法為全血血小板凝集能力測定方法，由凝集曲線和凝集臨界值算出全血中的血小板凝集臨界值系數，通過血小板凝集臨界值系數包含在哪個范圍來判定全血中的血小板凝集能力正常與否。

另外，專利文獻4中公開了血小板機能檢査方法，其特征為：使混合了微量血小板活化試劑進行抗凝處理后的血液通過至少在內面的一部分具備血小板易粘接面的毛細管，觀察或測定該血液在毛細管內的行為以檢査血小板的機能。

現有技術文獻

專利文獻

專利文獻1：日本特公平8-10226號公報

專利文獻2：日本特開2005-291849號公報

專利文獻3：日本特開2006-300859號公報

專利文獻4：國際公開文本第2010/018833號

非專利文獻

非專利文獻1：Morphologic?alterations?of?blood?cells?in?the?impedance?aggregometer.Blood?Cells.1985；11(2):325-36,337-9.

非專利文獻2：A?method?of?testing?platelet?aggregation?in?native?whole?blood.Thromb?Res.1985年4月1日；38(1)：91-100.

發明內容

在以往的血小板凝集能力測定中，可以通過添加血小板活化試劑來測定凝集塊形成和其發生的臨界值，而定量地測定其穩定性和持續性卻很困難。即，在該方法中，與不同濃度的血小板活化試劑反應數分鐘后，經吸引使之通過過濾器，通過由堵塞造成的負壓來測定導致血小板凝集的濃度，雖然可以確定引起堵塞的血小板活化試劑的臨界值濃度，然而由于通過的血液流速對濾網的堵塞程度存在依賴關系因而產生變化，從而不能正確且定量地評價。

而且，在吸引的情況下，由于血液和吸引用注射器之間存在空氣，特別是在低流速范圍(100μm/分鐘以下)內，流速不能保持恒定，而且不能隨時間變化測定在恒定流速下通過過濾器的正確的壓力變化。進一步地，要調整各種濃度的血小板活化試劑，還必須進行吸引，也存在操作麻煩的問題。

本發明正是鑒于上述情況而作出的，本發明的課題是提供能夠定量評價血小板凝集開始的速度以及凝集塊的穩定性和持續性的方法和裝置。