[發(fā)明專利]使用細(xì)胞內(nèi)生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移識別生物活性劑的細(xì)胞靶標(biāo)結(jié)合

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201380064252.4
• 申請日: 2013-12-12
• 公開（公告）號: CN104871001B
• 公開（公告）日: 2018-09-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: C·W·希特科;T·柯克蘭;T·馬赫萊特;R·F·奧哈納;M·羅貝斯;K·伍德
• 申請（專利權(quán)）人: 普洛麥格公司
• 主分類號: G01N33/52
• 分類號: G01N33/52;C07D491/22;C07D491/147;C12N15/62;C12N5/10;C12N9/02;C12Q1/66;C40B40/04;C40B40/10
• 代理公司: 北京坤瑞律師事務(wù)所 11494
• 代理人: 岑曉東

本發(fā)明提供用于檢測和分析生物活性劑與細(xì)胞靶標(biāo)的細(xì)胞內(nèi)結(jié)合的組合物和方法。具體地說，本文提供拴系至熒光團(tuán)的生物活性劑；融合至生物發(fā)光報道子、或生物發(fā)光報道子的部分、組分或亞基的細(xì)胞靶標(biāo)；以及檢測和分析生物活性劑與隨其的細(xì)胞靶標(biāo)的相互作用的方法。

相關(guān)申請的交叉引用

本申請要求2012年12月12日提交的美國臨時專利申請序列No.61/736,429；2013年3月15日提交的美國臨時專利申請序列No.61/794,461；以及2013年9月19日提交的美國臨時專利申請序列No.61/880,048的優(yōu)先權(quán)，每個專利在此以引用的方式整體并入。

領(lǐng)域

本發(fā)明提供用于檢測和分析生物活性劑與細(xì)胞靶標(biāo)的細(xì)胞內(nèi)結(jié)合的組合物和方法。具體說來，本文提供拴系至熒光團(tuán)的生物活性劑；融合至生物發(fā)光報道子、或生物發(fā)光報道子的部分、組分或亞基的細(xì)胞靶標(biāo)；以及檢測和分析生物活性劑與隨其的細(xì)胞靶標(biāo)的相互作用的方法。

背景

分子種類與細(xì)胞靶標(biāo)的相互作用在理解細(xì)胞生理學(xué)和開發(fā)治療干預(yù)措施如新的合成藥物和生物藥劑中是極其重要的。需要精確且高效地測定靶標(biāo)結(jié)合(engagement)的方法，特別是在其中這些相互作用介導(dǎo)其表型響應(yīng)的活細(xì)胞內(nèi)。有效地檢測靶標(biāo)結(jié)合的能力對發(fā)現(xiàn)過程具有廣泛的啟示，包括高通量篩選、優(yōu)化對藥物先導(dǎo)物的命中物(hit)的篩選、以及發(fā)現(xiàn)和表征治療相關(guān)的細(xì)胞靶標(biāo)。

使用小分子文庫的基于表型的篩選在藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域中起重要作用。使用這種篩選方法，在沒有預(yù)先得知其潛在的細(xì)胞靶標(biāo)的情況下就其引發(fā)表型響應(yīng)(例如緩解疾病癥狀)的能力對化合物文庫進(jìn)行篩選。雖然此方法可用于鑒定能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞生理的生物活性劑，例如小分子，但確定這些小分子命中物的生物相關(guān)靶標(biāo)是主要的技術(shù)挑戰(zhàn)。另外，促進(jìn)一些想要的表型響應(yīng)的小分子可由于脫靶相互作用而成為體內(nèi)不利因素。為了預(yù)測藥物選擇性并使可能的副作用減至最少，重要的是還鑒定了脫靶相互作用(例如較低的親和力)。目前用于鑒定生物活性劑靶標(biāo)的大多數(shù)方法都依賴使用含有選擇性部分(例如生物活性劑或相關(guān)化合物)和分類部分(例如親和標(biāo)記物或固體支持物)的“雙官能”化合物從復(fù)雜的細(xì)胞裂解物富集這些靶標(biāo)。因為富集是基于化合物的結(jié)合特性，其中這些化合物對于其靶標(biāo)的固有親和力是不夠的，所以化合物類似物被設(shè)計以便共價地結(jié)合至靶標(biāo)(例如光交聯(lián))。通過任一種方法，靶標(biāo)分離的效力和特異性是必需的，且這些方法的失敗率很高。這些方法的失敗可能是由于靶標(biāo)的不充分捕獲或因非特異性捕獲所致的高本底。此失敗的影響因素包括：化合物以低至中等親和力在難以檢測的這些相對較弱的相互作用下結(jié)合多個靶標(biāo)；缺乏穩(wěn)固的、簡明的、無偏技術(shù)來表征檢測到的相互作用；不能在相互作用可依賴的天然細(xì)胞環(huán)境內(nèi)進(jìn)行靶標(biāo)分離；所提供的關(guān)于靶標(biāo)在細(xì)胞中的結(jié)合效能的信息有限；以及由于非特異性結(jié)合至固體支持物或官能化小分子所致的假陽性相互作用的高本底。

概述