[發明專利]抗-MIF抗體的細胞遷移測定方法

在審

• 申請號: 201380064094.2
• 申請日: 2013-12-05
• 公開（公告）號: CN104884955A
• 公開（公告）日: 2015-09-02
• 發明（設計）人: M·蒂塞爾;R·克西堡曼
• 申請（專利權）人: 巴克斯特國際公司;巴克斯特保健股份有限公司
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50;G01N33/68
• 代理公司: 上海市華誠律師事務所 31210
• 代理人: 湯國華

1.一種用于確定抗-MIF抗體的效價的測定方法，所述測定方法執行細胞遷移，且所述測定方法包括以下步驟：

-將能夠遷移的細胞提供至裝置的第一部分，其中，所述細胞包含MIF，

-將待測定的抗-(ox)MIF抗體添加至所述裝置的第二部分，該第二部分被配置為與所述裝置的第一部分相連接，使得允許細胞遷移和擴散，以及

-計量遷移抑制。

2.根據權利要求1所述的測定方法，其中所述抗-MIF抗體是抗-oxMIF抗體，優選其中所述抗體選自于由RAB0、RAB4、RAB9、RAM0、RAM4和/或RAM9構成的組，尤其優選RAM9。

3.根據權利要求1或2所述的測定方法，其中，所述裝置包括上室和下室，所述上室和下室通過具有孔的分離膜相連接，且細胞被添加至上室、抗體被添加至下室，其中優選該裝置是雙室的細胞遷移測定裝置(改良的Boyden室測定裝置)，更優選Transwell細胞遷移測定裝置。

4.根據上述任一項權利要求所述的測定方法，其中所述細胞是表達(ox)MIF的細胞，優選是在細胞表面表達(ox)MIF的細胞，優選其中所述細胞是來自疾病樣本的細胞，更優選其中所述細胞是單核細胞、優選人單核細胞，更優選人永生化單核細胞，最優選U937細胞，或THP-1人單核細胞或替代實施例中的大鼠NR8383單核細胞。

5.根據上述任一項權利要求所述的測定方法，其中所述細胞以細胞懸浮液的方式提供于適宜的遷移介質中以允許其遷移。

6.根據權利要求5所述的測定方法，其中所述遷移介質不包含蛋白質。

7.根據上述任一項權利要求所述的測定方法，其中所述抗體被添加在非毒性的生物緩沖液中供至第二部分，如下室，如室的下室，所述生物緩沖液具有適度弱酸及其共軛堿，優選甘氨酸緩沖液、N-取代的?；撬峋彌_液、或磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)緩沖液。

8.根據上述任一項權利要求所述的測定方法，其中添加所述抗體直至在所述測定中的最終濃度為0.01-100nM，優選為0.02至50nM，優選0.04-30nM，優選作為系列稀釋。

9.根據上述任一項權利要求所述的測定方法，所述測定裝置例如所述室在添加細胞和抗體后培養6-20小時，優選8-12小時，優選在約37℃下培養，其中所述細胞是U937細胞，且其中所述膜具有約5μm的孔徑。

10.根據上述任一項權利要求所述的測定方法，其中對已遷移的細胞進行計數，優選上述培養步驟之后、優選在下室中對已遷移的細胞進行計數，由此可獲取被測抗體的效價信息，優選通過計算半-最大抑制抗體濃度(IC₅₀值)來獲取該信息。

11.根據上述任一項權利要求所述的測定方法，其中所述細胞在用于測定之前經受10至48小時，優選8-16小時，更優選10-12小時的血清饑餓。

12.根據上述任一項權利要求所述的測定方法，其中所述細胞來源于工作細胞庫。

13.根據上述任一項權利要求所述的測定方法，其中，所述裝置中不添加(ox)MIF。

14.一種測定試劑盒，其用于測定抗-(ox)MIF-抗體的效價，包括為了進行上述任一項或多項權利要求中所述的測定方法而必需的所有試劑，優選包含

-表達MIF的細胞

-抗體稀釋緩沖液(例如，甘氨酸緩沖液)

-遷移介質，和/或

-兩腔室細胞遷移系統。

15.藥物或診斷組合物，其包含抗-(ox)MIF抗體，其中所述抗-(ox)MIF抗體的特征在于其已進行上述任一項權利要求中所述的效價測定。