[發(fā)明專利]凝血酶溶液及其使用方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201380063192.4
• 申請日: 2013-11-28
• 公開（公告）號: CN104822387A
• 公開（公告）日: 2015-08-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: R.梅德勒;O.貝亞伊夫;L.巴;I.努爾
• 申請（專利權(quán)）人: 奧姆里克斯生物藥品有限公司
• 主分類號: A61K38/48
• 分類號: A61K38/48;A61K9/19
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 羅文鋒;彭昶

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及藥物溶液領(lǐng)域，并且更具體地涉及用于凍干凝血酶水溶液的方法、用于此類凍干方法的凝血酶溶液，以及通過此類方法產(chǎn)生的固體凝血酶組合物。

背景技術(shù)

凝血酶是在凝血過程中由血漿中的凝血酶原形成的蛋白水解酶。

凝血酶作為凝血因子廣泛用于臨床應(yīng)用以通過將纖維蛋白原轉(zhuǎn)化成纖維蛋白而使傷口止血。它是外科敷料的常見組分，并且已與纖維蛋白原及其它凝血蛋白質(zhì)組合用于二組分止血系統(tǒng)諸如纖維蛋白膠、粘合劑和密封劑。

已知的是，在貯存之前將凝血酶溶液凍干以產(chǎn)生固體凝血酶組合物，以便減少蛋白質(zhì)降解，其中該固體凝血酶組合物可在使用前復(fù)原。凍干通常是指冷凍混合物以及然后降低水濃度(例如通過升華到不支持生物或化學(xué)反應(yīng)的水平)的方法。由凍干方法所得的多孔海綿狀固體材料稱為粉餅。希望此類固體凝血酶組合物具有低水含量(例如，小于約3％)，長期(優(yōu)選地在室溫下)保持結(jié)構(gòu)和功能穩(wěn)定性，以及在復(fù)原時與在凍干之前溶液中凝血酶的活性相比保持高百分比的凝血酶活性。

背景技術(shù)凝血酶溶液的實例在EP?813598B1、US?5,605,884、US?4,877,608、US?2010/0074865、US?5,733,873、EP?1766003和US?2010/0168018中有所描述。背景技術(shù)凝血酶溶液在所存在的賦形劑的數(shù)量和類型方面以及在各種賦形劑的濃度方面變化相當(dāng)大。

冷凍保護劑或穩(wěn)定劑通常用于凝血酶溶液以避免凝血酶因冷凍應(yīng)力而變性或失活，以使蛋白質(zhì)在后續(xù)生產(chǎn)步驟中穩(wěn)定，以及延長儲存壽命。冷凍保護劑的示例包括糖，諸如蔗糖、乳糖和海藻糖；糖醇，諸如甘露糖醇；以及表面活性劑，諸如聚乙二醇、TritonX-100、TWEEN-20和TWEEN-80。除了充當(dāng)穩(wěn)定劑以外，甘露糖醇和蔗糖(在較低程度上)還被用作膨松劑，其有助于提供具有強物理結(jié)構(gòu)的粉餅。使用膨松劑對于具有低固體物質(zhì)含量(單位體積)的配方是尤其重要的。

人血清白蛋白(HSA)還廣泛用于生物制藥配方，作為穩(wěn)定劑和膨松劑(H.R.Constantino，M.J.Pikal：《生物制藥的凍干》，斯普林格出版社，2004年(Lyophilization?of?Biopharmaceuticals，Springer，2004))。

EP?813598B1公開了用于凍干的簡單凝血酶配方，其包含：40mM的葡糖酸、20mM的檸檬酸三鈉和150mM的NaCl；US?5,605,884和US?4,877,608公開了包含高達(dá)10％的糖諸如蔗糖、甘露糖醇或麥芽糖的配方；US?2010/0074865公開了包含5.7％的乳糖、3.1％的海藻糖和0.001％的TWEEN-80的配方；以及US?5,733,873公開了包含0.001-0.025％的聚山梨醇酯80(TWEEN-80)且具有或不具有0.1％的PEG?4000和2％的甘露糖醇的配方。

氯化鈉(NaCl)常用于減少蛋白質(zhì)在生物制藥配方的凍干過程中的沉淀和聚集。然而，EP?1766003公開了NaCl可能存在問題，因為其降低玻璃化轉(zhuǎn)變溫度，從而必須采用低初級干燥溫度和延長的干燥循環(huán)時間。另外，US?2010/0168018公開了不具有NaCl或具有以微量存在的NaCl的配方。

此類凍干已知的凝血酶溶液的方法的持續(xù)時間通常非常長，這增加了方法的成本和/或產(chǎn)生如下固體凝血酶組合物：其具有相對高的水含量和/或在復(fù)原時與凍干前溶液中的凝血酶活性相比保持相對低百分比的凝血酶活性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明在其一些實施例中涉及用于凍干凝血酶水溶液的方法、用于此類凍干方法的凝血酶溶液，和通過此類方法產(chǎn)生的固體凝血酶組合物。在一些實施例中，本文所公開的溶液和方法使得能夠使用比用于凍干凝血酶溶液的已知方法耗時更短(例如，短37％)的凍干方法制備固體凝血酶組合物，從而提高凍干能力和成本效益。

在一些實施例中，本文所述的凍干方法產(chǎn)生這樣的固體凝血酶組合物：其具有相對低的水含量和/或在室溫下在相對長的一段時間內(nèi)高度穩(wěn)定，和/或在復(fù)原時表現(xiàn)出高凝血酶活性恢復(fù)率。在一些實施例中，該方法包括使用最佳的含水凝血酶配方。

本發(fā)明的方面和實施例在下文的說明書和所附權(quán)利要求中描述。

根據(jù)本文所述的一些實施例的一個方面，提供了一種用于凍干凝血酶水溶液的方法，該方法包括提供包含以下成分的凝血酶水溶液：約1至低于約4.6％(w/v)的糖或糖醇、至少約0.7至低于約1.75％(w/v)的氯化鈉、約0.2至約3％的白蛋白、氯化鈣和乙酸鈉、以及凍干該凝血酶水溶液。