[發明專利]使用PVDF膜純化細胞結合劑細胞毒性劑綴合物

在審

• 申請號: 201380061552.7
• 申請日: 2013-10-04
• 公開（公告）號: CN105209592A
• 公開（公告）日: 2015-12-30
• 發明（設計）人: X·K·陳;X·李
• 申請（專利權）人: 伊繆諾金公司
• 主分類號: C12M1/12
• 分類號: C12M1/12;B01D39/14
• 代理公司: 北京商專永信知識產權代理事務所(普通合伙) 11400
• 代理人: 鄔玥;葛強

1.一種用于制備純化的細胞結合劑細胞毒性劑綴合物的方法，其包括使包含細胞結合劑細胞毒性劑綴合物和一種或多種雜質的混合物經過聚二氟乙烯(PVDF)膜，以從所述混合物除去至少一部分的所述雜質，從而提供純化的細胞結合劑細胞毒性劑綴合物。

2.如權利要求1所述的方法，其中所述方法順次重復兩次、三次或四次。

3.如權利要求1或2所述的方法，其中所述方法還包括使所述混合物經過離子交換色譜膜以從所述混合物中除去至少一部分的所述雜質。

4.如權利要求3所述的方法，其中使所述混合物經過離子交換色譜膜之前使所述混合物經過PVDF膜。

5.如權利要求3所述的方法，其中使所述混合物經過PVDF膜之前使所述混合物經過離子交換色譜膜。

6.如權利要求1所述的方法，其中所述方法包括：

(a)使細胞結合劑與細胞毒性劑接觸，以形成包含所述細胞結合劑和所述細胞毒性劑的第一混合物，然后使所述第一混合物與包含接頭的雙官能交聯試劑在pH為約4至約9的溶液中接觸，以提供包含所述細胞結合劑細胞毒性劑綴合物和一種或多種雜質的第二混合物，所述細胞結合劑細胞毒性劑綴合物包含經由所述接頭與所述細胞毒性劑化學偶聯的所述細胞結合劑；

(b)使所述第二混合物經過聚二氟乙烯(PVDF)膜，以除去至少一部分的所述雜質，從而提供所述細胞結合劑細胞毒性劑綴合物的純化的第二混合物；以及

(c)使步驟(b)之后的所述純化的第二混合物經歷切向流過濾、選擇性沉淀、非吸附色譜、吸附過濾、吸附色譜或其組合，以從所述雜質中進一步純化所述細胞結合劑細胞毒性劑綴合物，從而制備所述細胞結合劑細胞毒性劑綴合物的純化的第三混合物，其中相較于所述純化的第二混合物所述純化的第三混合物包含減少量的所述雜質。

7.如權利要求6所述的方法，其中在步驟(c)之前順次重復步驟(b)兩次、三次或四次。

8.如權利要求6或7所述的方法，其中吸附色譜在步驟(c)中使用。

9.如權利要求6-8中任一項所述的方法，其中所述吸附色譜選自羥磷灰石色譜、疏水電荷誘導色譜(HCIC)、疏水作用色譜(HIC)、離子交換色譜、混合模式離子交換色譜、固定化金屬親和色譜(IMAC)、染料配位體色譜、親和色譜、反相色譜及其組合。

10.如根據權利要求9所述的方法，其中所述吸附色譜是離子交換色譜。

11.如根據權利要求10所述的方法，其中所述離子交換色譜是陶瓷羥磷灰石(CHT)色譜。

12.如權利要求6或7所述的方法，其中切向流過濾在步驟(c)中使用。

13.如權利要求6-12中任一項所述的方法，其中通過以下實現步驟(a)中的所述接觸：在反應容器中提供所述細胞結合劑，將所述細胞毒性劑加入到所述反應容器中以形成包含所述細胞結合劑和所述細胞毒性劑的所述第一混合物，然后將所述雙官能交聯試劑加入到所述第一混合物中。

14.如權利要求6-13中任一項所述的方法，其還包括在步驟a-b或步驟b-c之間保持所述混合物以從所述細胞結合劑釋放所述不穩定結合的接頭。

15.如權利要求14所述的方法，其中所述混合物在約2℃至約8℃的溫度下保持約20小時。

16.如權利要求6-15中任一項所述的方法，其還包括在步驟(a)-(b)之間淬滅所述第二混合物以淬滅任何未反應的細胞毒性劑和/或未反應的雙官能交聯試劑。

17.如權利要求16所述的方法，其中通過使所述第二混合物與淬滅劑接觸來淬滅所述混合物，所述淬滅劑與所述游離細胞毒性劑反應。

18.如權利要求17所述的方法，其中所述淬滅劑選自4-馬來酰亞胺基丁酸、3-馬來酰亞胺基丙酸、N-乙基馬來酰亞胺、碘乙酰胺和碘乙酰胺丙酸。

19.如權利要求6-18中任一項所述的方法，其中所述方法還包括使所述混合物在步驟(a)和(b)之間經過離子交換色譜膜。

20.如權利要求6-19中任一項所述的方法，其中所述方法還包括使所述混合物在步驟(b)和(c)之間經過離子交換色譜膜。