[發明專利]使用PVDF膜純化細胞結合劑細胞毒性劑綴合物

在審

• 申請號: 201380061552.7
• 申請日: 2013-10-04
• 公開（公告）號: CN105209592A
• 公開（公告）日: 2015-12-30
• 發明（設計）人: X·K·陳;X·李
• 申請（專利權）人: 伊繆諾金公司
• 主分類號: C12M1/12
• 分類號: C12M1/12;B01D39/14
• 代理公司: 北京商專永信知識產權代理事務所(普通合伙) 11400
• 代理人: 鄔玥;葛強

相關申請的交叉引用

本專利申請要求2012年10月4日提交的美國臨時專利申請號61/709,891的權益，其以引用方式并入本文。

電子方式遞交的材料以引用方式并入

與此同時遞交的計算機可讀的核苷酸/氨基酸序列表以引用方式整體并入本文并且如下識別：2013年10月3日創建的名稱為“714287SequenceListing.TXT”的8，259字節的一個ASCII(文本)文件。

發明背景

用于治療癌癥和其他疾病的抗體-藥物綴合物通常由三個不同的成分構成：細胞結合劑、接頭和細胞毒性劑。一種常用的制造方法包括：修飾步驟，其中細胞結合劑與雙官能接頭反應以形成與具有反應基團的接頭共價連接的細胞結合劑；純化步驟，其中從修飾反應的其他組分純化經修飾的抗體；綴合步驟，其中經修飾的細胞結合劑與細胞毒性劑反應以形成從接頭(使用反應基團)至細胞毒性劑的共價化學鍵；以及第二純化步驟，其中從綴合反應的其他組分純化綴合物。

最近的臨床試驗已顯示對抗體-藥物綴合物在治療許多不同類型的癌癥中有希望的作用。因此，有必要產生可以用來治療患者的高純度和高穩定性的綴合物。盡管在制備抗體-藥物綴合物方面有進步，但是目前的方法受若干因素的限制。例如，由這些方法所產生的綴合物包含增加量的雜質，包括游離的細胞毒性劑(例如，細胞毒性劑二聚體相關種類)和/或高分子量種類(例如，二聚體和其他更高階聚集體)。在本領域中所用的現有純化方法，如切向流過濾和吸附色譜，不能有效地除去這些雜質而不顯著降低產量和/或對于大規模的制造過程很麻煩。

因此，仍然需要制備比現有方法產生的抗體-藥物綴合物更穩定且具有更高純度的抗體-藥物綴合物的改進方法。本發明提供這樣一種方法。通過本文提供的發明的描述，本發明這些和其他的優點，以及另外的發明特征將會顯而易見。

發明概述

本發明提供用于制備純化的細胞結合劑細胞毒性劑綴合物的方法，包括使包含細胞結合劑細胞毒性劑綴合物和一種或多種雜質的混合物經過聚二氟乙烯(PVDF)膜，以從混合物除去至少一部分的雜質，從而提供純化的細胞結合劑細胞毒性劑綴合物。本發明還包括包含化學偶聯至根據本文描述的方法制備的細胞毒性劑的細胞結合劑的綴合物。

附圖中幾個視圖的簡述

圖1A-B是描述在PVDF過濾之前(圖1A)和之后(圖1B)，存在于抗體-SMCC-DM1綴合物反應混合物中的種類的色譜。

圖2是描述在經由多個PVDF膜過濾之前和之后(x軸)，存在于抗體-SMCC-DM1綴合物反應混合物中的DM1二聚體種類的百分比(y軸)的線形圖。

發明詳述

本領域的普通技術人員將理解，包含化學偶聯至細胞毒性劑的細胞結合劑(如抗體)的綴合物(“抗體-細胞毒性劑綴合物”)通常通過以下制備：在低pH(即，pH7.0或以下)用雙官能交聯試劑修飾抗體，純化具有與其結合的接頭的抗體，使細胞毒性劑與其結合的具有接頭的抗體綴合，以及純化抗體-細胞毒性劑綴合物。最近，已經開發了通過使穩定地結合到細胞結合劑的接頭的量最大化并且使導致綴合不穩定的不需要的副反應減至最少來產生穩定性提高的綴合物的方法。例如，已開發了這樣的方法，其中用于制備所述綴合物的方法在一個步驟中(參見，例如，在美國專利申請公開號2012/0253021中描述的方法)和/或在高pH(例如，pH7或更高)(參見，例如，在國際專利申請公開號WO2012/135522中描述的方法)下進行，從而增加具有與其穩定結合的接頭的細胞結合劑的希望的種類的水平并且減少不希望的反應產物(例如，具有與其不穩定結合的接頭的細胞結合劑)的水平。雖然這樣的方法產生穩定性提高的綴合物，但是已經發現這些方法產生具有增加的雜質水平的綴合物，所述雜質如游離細胞毒性劑(例如，細胞毒性劑二聚體相關種類)和/或高分子量種類(如二聚體和其他更高階聚集體)。本領域中使用的現有純化方法，如切向流過濾和吸附色譜，不能有效地除去這些雜質而不顯著降低產量和/或對于大規模的制造過程很麻煩。