[發明專利]高純度和優異產量的正確折疊的依那西普

有效

• 申請號: 201380058650.5
• 申請日: 2013-09-10
• 公開（公告）號: CN104902914B
• 公開（公告）日: 2019-01-01
• 發明（設計）人: 荒川力;道格拉斯·法勒
• 申請（專利權）人: 科榮生生物科學公司
• 主分類號: A61K38/16
• 分類號: A61K38/16
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟;楊生平

1.一種用于從不正確折疊的依那西普中分離正確折疊的依那西普的混合模式色譜分析方法，其包含以下步驟：

(a)將同時含依那西普的正確折疊和不正確折疊構象的第一含依那西普的蛋白混合物與同時具有離子交換結構部分和疏水結構部分的混合模式色譜樹脂結合，其中，所述混合模式色譜樹脂為Capto^TMMMC混合模式色譜樹脂或Capto^TMAdhere混合模式色譜樹脂；

(b)通過使所述混合模式樹脂與鹽溶液接觸，從所述混合模式樹脂上洗脫正確折疊的依那西普以得到第二含依那西普的蛋白混合物，所述第二含依那西普的蛋白混合物含比所述第一依那西普混合物更高比例的正確折疊的依那西普；其中，所述鹽溶液含有氯化鈉或硫酸鈉；其中，所述鹽溶液逐步應用或以從0至1M的線性濃度梯度應用；

并且其中，所述不正確折疊的依那西普構成少于10wt.％的步驟(b)中得到的洗脫液；所述正確折疊的依那西普構成多于90wt.％的步驟(b)中得到的洗脫液；且正確折疊的和不正確折疊的依那西普的組合量構成至少95wt.％的步驟(b)中得到的洗脫液，

其中，步驟(a)和(b)在4.5至8.5的pH下實施；并且所述鹽溶液任選地進一步包含精氨酸；并且

其中，所述方法排除了疏水作用色譜步驟的使用，除了當實施僅用于分析的目的時。

2.根據權利要求1所述方法，其中，所述混合模式色譜樹脂是Capto^TMMMC混合模式色譜樹脂。

3.根據權利要求1所述方法，其中，在步驟(b)中，與步驟(b)中樹脂接觸的鹽溶液的pH是變化的。

4.根據權利要求1所述方法，其中，正確折疊的蛋白質的量為在步驟(a)中引入所述樹脂的蛋白質混合物中存在的蛋白質的量的至少70wt.％。

5.根據權利要求1所述方法，其中，通過在A280處的UV吸光度測定步驟(b)的洗脫液中存在的蛋白質的量；通過疏水作用色譜法測定步驟(b)的洗脫液中正確折疊的依那西普的量；且通過尺寸排阻色譜法測定步驟(b)的洗脫液中存在的正確折疊的和不正確折疊的依那西普的組合量。

6.根據權利要求1所述方法，其中，以下面的方式實踐所述方法兩次或更多次：

通過實施步驟(a)和(b)實施第一混合模式分離(分離#1)；然后

通過再次實施步驟(a)和(b)實施第二混合模式分離(分離#2)；

其中，在分離#1的步驟(b)中得到的洗脫液用作在分離#2的步驟(a)中的含蛋白質混合物的溶液。

7.根據權利要求6所述方法，其中，在分離#1中使用的混合模式樹脂與在分離#2中使用的混合模式樹脂相同或不同。

8.根據權利要求7所述方法，其中，以選自下面組合的方式實施分離#1和分離#2：

分離#1使用包含陽離子交換劑的混合模式色譜樹脂作為所述混合模式色譜樹脂且分離#2使用包含陰離子交換劑的混合模式色譜樹脂作為所述混合模式色譜樹脂；

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分離#1使用包含陰離子交換劑的混合模式色譜樹脂作為所述混合模式色譜樹脂且分離#2使用CAPTO MMC作為所述混合模式色譜樹脂；

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分離#1使用CAPTO MMC作為所述混合模式色譜樹脂且分離#2使用CAPTO MMC作為所述混合模式色譜樹脂；或

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分離#1使用CAPTO ADHERE作為所述混合模式色譜樹脂

分離#2使用CAPTO ADHERE作為所述混合模式色譜樹脂。

9.根據權利要求8所述方法，其中，以下面的方式實施分離#1和分離#2：分離#1使用CAPTO MMC作為所述混合模式色譜樹脂；且分離#2使用CAPTO ADHERE作為所述混合模式色譜樹脂。

10.根據權利要求1所述方法，其中，所述鹽溶液進一步包含精氨酸。