[發明專利]用于非洗提樣品的一步法核酸擴增的方法

有效

• 申請號: 201380058557.4
• 申請日: 2013-11-06
• 公開（公告）號: CN104769111B
• 公開（公告）日: 2021-04-27
• 發明（設計）人: P.J.塔特內爾;K.L.拉梅頓;A.S.皮爾塞;E.阿斯曼
• 申請（專利權）人: 環球生命科學解決方案運營英國有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12Q1/6806
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 羅文鋒;林森

本發明涉及方法和試劑盒，其可用于擴增核酸，優點是減少用戶時間和可能的污染。為了便于加工和擴增核酸樣品，將樣品結合至固體支持物并在無需純化的情況下在核酸擴增反應例如聚合酶鏈反應(PCR)中直接使用。

發明領域

本發明涉及核酸擴增的領域，特別是使用聚合酶鏈反應以擴增核酸。本發明提供方法和試劑盒，其可用于按如下擴增核酸：將FTA? Elute固體支持物與PCR試劑組合用于核酸樣品的一步法擴增。本發明在核酸的長期儲存和便于加工中具有應用并且尤其在基因分型、診斷學和法醫學中是有用的。

背景

聚合酶鏈反應(PCR)是在分子生物學中用于擴增核酸的常用工具。US4683202(Mullis, Cetus Corporation)描述了用于擴增包含于核酸或其混合物中的任何所需的特定核酸序列的方法。

在濾紙或化學改性的基質上的核酸的長期儲存、轉移和存檔是用于在將DNA或RNA以用于遺傳分析(例如PCR)的形式提取和分離之前保藏遺傳材料的周知的技術。因此，EP1563091 (Smith等人, Whatman)涉及用于儲存來自樣品(例如細胞或細胞裂解物)的核酸的方法。將核酸分離并在室內溫度和濕度下，在種類廣泛的濾器和其它類型的固體支持物或固相介質上長時間儲存。此外，該文件描述了用于在管、柱或多孔板中的寬泛范圍的固體支持基質上儲存含核酸的樣品的方法。

WO/9003959 (Burgoyne) 描述了用于儲存DNA(包括血液DNA)的基于纖維素的固體支持物，其包括具有化合物或組合物的固體基質，所述化合物或組合物保護摻入基質中或吸收到基質上的DNA免于降解。此文件也公開了用于使用固體介質儲存DNA和用于DNA的回收或DNA的原位使用的方法。

US5496562(Burgoyne)描述了用于DNA儲存的基于纖維素的固體介質和方法。公開了用于將DNA存儲和轉移至固體介質上的方法和涉及(a)從固體介質中回收DNA或(b)原位在固體介質上使用DNA (例如，通過PCR的DNA序列擴增)的方法。不幸的是，所描述的方法僅將表面活性劑或去垢劑摻入至固體介質的表面上并因此受累于缺點：它們需要分離步驟用于在實施PCR之前除去去垢劑。

WO993900 (Gentra)也描述了用于加工和擴增DNA的方法。該方法包括將含DNA的樣品與固體支持物接觸的步驟，其中裂解試劑被結合至固體支持物。隨后將所述DNA用DNA純化試劑處理并純化。該申請在固體支持物上不包含多價螯合劑并且需要分離步驟用于在擴增之前除去裂解試劑和純化DNA。

WO9639813 (Burgoyne)描述了用于儲存遺傳材料的樣品和隨后的分析的固體介質；所述固體介質包含蛋白變性劑和螯合劑。所述方法是關于螯合劑的，所述螯合劑為任何能夠絡合多價離子(其包括Ⅱ族和Ⅲ族多價金屬離子和過度金屬離子)的化合物。該發明并沒有具體提及環糊精作為螯合劑，它也并沒提出可按一步法實施PCR分析。

US5705345 (Lundin等人)描述核酸制備的方法，其中將含細胞樣品裂解以釋放核酸并且用環糊精處理該樣品以中和提取劑。此系統的優點是：傳統去垢劑的去除需要分離步驟，但在加入環糊精中和去垢劑的情況下會除去了所需的分離步驟并減少了污染的機會。

GB2346370 (Cambridge Molecular Technologies Ltd)描述了將包含細胞(其含核酸)的樣品應用至濾器上，所述細胞被濾器保留而污染并沒被保留。將所述細胞在濾器上裂解并與核酸一起保留。后續步驟滲除細胞裂解物同時保留核酸。

WO9618731 (Deggerdal)描述了分離核酸的方法，其中將所述樣品結合至固體支持物上并且將樣品與去垢劑接觸并實施后續步驟以分離核酸。

WO0053807(Smith, Whatman)描述了用于儲存和裂解含遺傳材料(其可被洗提和分析)的樣品的介質。所述介質用裂解試劑涂層。此外，所述介質可用弱堿、螯合劑、表面活性劑和任選尿酸涂層。