[發明專利]用于非洗提樣品的一步法核酸擴增的方法

有效

• 申請號: 201380058557.4
• 申請日: 2013-11-06
• 公開（公告）號: CN104769111B
• 公開（公告）日: 2021-04-27
• 發明（設計）人: P.J.塔特內爾;K.L.拉梅頓;A.S.皮爾塞;E.阿斯曼
• 申請（專利權）人: 環球生命科學解決方案運營英國有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12Q1/6806
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 羅文鋒;林森

1.一種用于擴增核酸的方法，其包含以下步驟：

i) 將包含離液鹽的固體支持物與含核酸的細胞樣品接觸，

ii) 將直接從步驟i)中獲得的所述固體支持物轉移至反應容器，

iii) 將在直接從步驟i)中獲得的所述固體支持物上的所述核酸與核酸擴增試劑溶液一起孵育，

iv) 擴增直接從步驟i)中獲得的所述固體支持物上的所述核酸以產生擴增的核酸，其中所述擴增方法是定量聚合酶鏈反應，

v) 定量擴增的核酸和任選地,

vi) 使用短串聯重復(STR)概況分析以產生STR分布圖,

其中步驟i)-vi)在固體支持物的存在下實施，所述固體支持物用十二烷基硫酸鈉(SDS)、乙二胺四乙酸(EDTA)和尿酸浸漬，并且

其中所述方法不是診斷方法。

2.權利要求1的方法，其中在加入所述細胞樣品之前所述固體支持物在反應容器中。

3.權利要求1或2的方法，其中所述核酸擴增試劑溶液包含聚合酶、脫氧核糖核苷酸三磷酸(dNTP)、反應緩沖液和至少一種引物，其中所述引物任選用染料標記。

4.權利要求1或2的方法，其中所述離液鹽是胍鹽。

5.權利要求4的方法，其中所述胍鹽選自硫氰酸胍、氯化胍和鹽酸胍。

6.權利要求1或2的方法，其中所述離液鹽是鈉鹽。

7.權利要求1或2的方法，其中所述離液鹽是碘化鈉。

8.權利要求1或2的方法，其中所述固體支持物選自基于玻璃或二氧化硅的固相介質、基于塑料的固相介質或基于纖維素的固相介質。

9.權利要求1或2的方法，其中所述固體支持物選自玻璃纖維、玻璃微纖維、硅膠、二氧化硅、硝酸纖維素、羧甲基纖維素、聚酯、聚酰胺、碳水化合物聚合物、聚丙烯、聚四氟乙烯、聚偏二氟乙烯、羊毛或多孔陶瓷。

10.權利要求1或2的方法，其中所述固體支持物是基于纖維素的基質。

11.權利要求10的方法，其中所述基于纖維素的基質呈預沖壓圓片的形式。

12.權利要求10的方法，其中所述基于纖維素的基質呈FTA?洗提卡的形式。

13.用于擴增核酸的方法，其包括以下步驟：

i) 將包含離液鹽的固體支持物與含核酸的細胞樣品接觸，

ii) 將直接從步驟i)中獲得的所述固體支持物轉移至反應容器，

iii) 將在直接從步驟i)中獲得的固體支持物上的所述核酸與核酸擴增試劑溶液一起孵育，

iv) 擴增在直接從步驟i)中獲得的固體支持物上的所述核酸以產生擴增的核酸，

v) 定量擴增的核酸，其中使用PCR成像系統定量所述擴增的核酸，

其中步驟i)-v)在固體支持物的存在下實施，所述固體支持物用十二烷基硫酸鈉(SDS)、乙二胺四乙酸(EDTA)和尿酸浸漬，并且

其中所述方法不是診斷方法。

14.權利要求13的方法，其中在加入所述細胞樣品之前所述固體支持物在反應容器中。

15.權利要求13或14的方法，其中所述擴增方法是聚合酶鏈反應。

16.權利要求13或14的方法，其中所述離液鹽選自硫氰酸胍、鹽酸胍、氯化胍和碘化鈉。

17.權利要求13或14的方法，其中所述固體支持物呈FTA?預沖壓圓片的形式。