[發(fā)明專利]小核糖核酸病毒樣顆粒在植物中的產(chǎn)生

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201380055096.5
• 申請日: 2013-08-29
• 公開（公告）號: CN104755614B
• 公開（公告）日: 2021-10-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬克-安德烈·蒂奧斯特;皮埃爾-奧利維耶·拉瓦伊;曼儂·庫特里;露西·鮑林;路易斯-菲利普·維澤納
• 申請（專利權(quán)）人: 莫迪卡戈公司
• 主分類號: C07K14/085
• 分類號: C07K14/085;C07K14/09;C07K14/095;C07K14/10;C12N15/82;C12N15/42;C12N15/41;A61K39/125;A61K39/135;A61P31/14;A61P37/04;C07K16/10
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11204
• 代理人: 王達(dá)佐;洪欣

1.在植物、植物部分或植物細(xì)胞中產(chǎn)生腸病毒樣顆粒(EVLP)的方法，包括：

a) 將第一核酸引入所述植物、所述植物的部分或所述植物細(xì)胞，所述第一核酸包含在所述植物、所述植物的部分或所述植物細(xì)胞中有活性的第一調(diào)節(jié)區(qū)，所述第一調(diào)節(jié)區(qū)與編碼腸病毒多蛋白的核苷酸序列可操作地連接，其中所述腸病毒多蛋白由腸病毒71多蛋白P1組成；

b) 將第二核酸引入所述植物、所述植物的部分或所述植物細(xì)胞，所述第二核酸包含在所述植物、所述植物的部分或所述植物細(xì)胞中有活性的第二調(diào)節(jié)區(qū)，所述第二調(diào)節(jié)區(qū)與編碼一種或一種以上的腸病毒71 3C或3CD蛋白酶的第二核苷酸序列可操作地連接；

c) 在允許第一核酸和第二核酸表達(dá)的條件下培養(yǎng)所述植物、所述植物的部分或所述植物細(xì)胞以產(chǎn)生所述腸病毒71多蛋白P1和所述一種或一種以上的腸病毒71 3C或3CD蛋白酶，所述腸病毒71多蛋白P1被加工成結(jié)構(gòu)蛋白VP1、VP3和VP0，或VP1、VP2、VP3和VP4，從而產(chǎn)生EVLP；以及

d) 收獲所述植物、所述植物的部分或所述植物細(xì)胞，并且純化EVLP。

2.如權(quán)利要求1中所述的方法，其中第一核酸相對于第二核酸的引入量的比為20:1至0.5:1。

3.如權(quán)利要求1中所述的方法，其中第一核酸和第二核酸在分開的核酸構(gòu)建體中。

4.如權(quán)利要求1中所述的方法，其中第一核酸和第二核酸在相同的核酸構(gòu)建體中。

5.如權(quán)利要求1中所述的方法，其中所述第一和第二核酸在所述植物、所述植物的部分或所述植物細(xì)胞中瞬時表達(dá)。

6.如權(quán)利要求1中所述的方法，其中所述第一和第二核酸在所述植物、所述植物的部分或所述植物細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)。

7.在植物、植物的部分或植物細(xì)胞中產(chǎn)生腸病毒樣顆粒(EVLP)的方法，包括：

a) 提供所述植物、所述植物的部分或所述植物細(xì)胞，所述植物、所述植物的部分或所述植物細(xì)胞包含第一核酸和第二核酸，所述第一核酸包含在所述植物、所述植物的部分或所述植物細(xì)胞中有活性的第一調(diào)節(jié)區(qū)，所述第一調(diào)節(jié)區(qū)與編碼腸病毒多蛋白的第一核苷酸序列可操作地連接，其中所述腸病毒多蛋白由腸病毒71多蛋白P1組成，所述第二核酸包含在所述植物、所述植物的部分或所述植物細(xì)胞中有活性的第二調(diào)節(jié)區(qū)，所述第二調(diào)節(jié)區(qū)與編碼一種或一種以上的腸病毒71 3C或3CD蛋白酶的第二核苷酸序列可操作地連接；

b) 在允許所述核酸表達(dá)的條件下，培養(yǎng)所述植物、所述植物的部分或所述植物細(xì)胞以產(chǎn)生所述腸病毒71多蛋白P1和所述一種或一種以上的腸病毒71 3C或3CD蛋白酶，所述腸病毒71多蛋白P1被加工成結(jié)構(gòu)蛋白VP1、VP3和VP0，或VP1、VP2、VP3和VP4，從而產(chǎn)生EVLP；以及

c) 收獲所述植物、所述植物的部分或所述植物細(xì)胞，并且純化EVLP。

8.如權(quán)利要求7中所述的方法，其中第一核酸相對于第二核酸的引入量的比為20:1至0.5:1。

9.如權(quán)利要求7中所述的方法，其中第一核酸和第二核酸在分開的核酸構(gòu)建體中。

10.如權(quán)利要求7中所述的方法，其中第一核酸和第二核酸在相同的核酸構(gòu)建體中。

11.如權(quán)利要求1至10中任一項所述的方法，其中所述第一核酸包含與一種或多種豇豆花葉病毒(comovirus)增強(qiáng)子、編碼所述腸病毒多蛋白的核苷酸序列和一種或多種擴(kuò)增元件可操作地連接的第一調(diào)節(jié)區(qū)，并且編碼復(fù)制酶的第三核酸被引入所述植物、所述植物的部分或所述植物細(xì)胞中。

12.如權(quán)利要求1至10中任一項所述的方法，其中所述第二核酸不包含一種或多種擴(kuò)增元件或一種或多種豇豆花葉病毒增強(qiáng)子。

13.植物提取物，其包含由權(quán)利要求1至10中任一項所述的方法產(chǎn)生的腸病毒樣顆粒(EVLP)。