[發明專利]CRZ1突變型真菌細胞

有效

• 申請號: 201380054875.3
• 申請日: 2013-10-17
• 公開（公告）號: CN104736694B
• 公開（公告）日: 2020-08-11
• 發明（設計）人: B.蔣;J.莊
• 申請（專利權）人: 默沙東公司
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李波;萬雪松

1.一種分離的巴斯德畢赤酵母宿主細胞，其缺乏功能性CRZ1多肽，并包含(i) 功能性ATT1多肽，(ii) 突變、破壞、截短、部分缺失或完全缺失的內源OCH1，和(iii) 編碼異源多肽的異源多核苷酸；

其中內源CRZ1基因編碼內源CRZ1多肽，其不同于包含SEQ ID NO: 3中所示的氨基酸序列的野生型CRZ1多肽之處在于所述內源CRZ1多肽包含選自下述的突變：

L33→終止；

Q214→終止；

L294→終止；

S298→終止；

E403→G；

F406→S；

F406→L；

C411→F；和

K469→N。

2.權利要求1的分離的巴斯德畢赤酵母宿主細胞：

(i) 其中所述分離的巴斯德畢赤酵母宿主細胞的一種或多種內源β-甘露糖基轉移酶基因是突變、破壞、截短或者部分或完全缺失的；

(ii) 其中所述分離的巴斯德畢赤酵母宿主細胞包含編碼α-1,2甘露糖苷酶的多核苷酸；

(iii) 其中所述分離的巴斯德畢赤酵母宿主細胞的一種或多種內源磷酸甘露糖基轉移酶是突變、破壞、截短或者部分或完全缺失的；

(iv) 其中所述分離的巴斯德畢赤酵母宿主細胞包含單亞基寡糖基轉移酶；

(v) 其中所述分離的巴斯德畢赤酵母宿主細胞的內源ALG3是突變、破壞、截短或者部分或完全缺失的；

(vi) 其中所述分離的巴斯德畢赤酵母宿主細胞包含編碼內切甘露糖苷酶的多核苷酸；

(vii) 其中所述分離的巴斯德畢赤酵母宿主細胞包含編碼雙功能UDP-N-乙酰葡糖胺-2-差向異構酶/N-乙酰甘露糖胺激酶、N-乙酰神經氨酸-9-磷酸合酶、或CMP-唾液酸合酶的一種或多種多核苷酸；

(viii) 包含編碼半乳糖基轉移酶的多核苷酸；

(x) 包含編碼核苷酸糖轉運蛋白的多核苷酸；

(xi) 包含編碼唾液酸轉移酶的多核苷酸；

(xii) 包含編碼乙酰氨基葡萄糖轉移酶的多核苷酸；和/或

(xiii) 其中一種或多種內源蛋白酶是突變、破壞、截短或者部分或完全缺失的。

3.權利要求1或2的分離的巴斯德畢赤酵母宿主細胞，其中所述異源多肽是免疫球蛋白。

4.一種用于生產在生物過程發酵條件下具有增強的溫度抗性和增加的穩健性的分離的巴斯德畢赤酵母細胞的方法，其包括將選自下述的突變引入所述巴斯德畢赤酵母細胞中的內源CRZ1：

L33→終止；

Q214→終止；

L294→終止；

S298→終止；

E403→G；

F406→S；

F406→L；

C411→F；和

K469→N。

5.一種分離的巴斯德畢赤酵母宿主細胞，其通過權利要求4的方法產生。

6.一種用于制備權利要求1-3中任一項的分離的巴斯德畢赤酵母宿主細胞的方法，其包括將異源多核苷酸引入細胞內，所述異源多核苷酸與內源CRZ1同源重組，并且部分或完全缺失所述內源CRZ1或者破壞所述內源CRZ1。

7.一種分離的巴斯德畢赤酵母宿主細胞，其通過權利要求6的方法產生。