[發明專利]糖脂質的制造方法

在審

• 申請號: 201380054186.2
• 申請日: 2013-10-03
• 公開（公告）號: CN104736705A
• 公開（公告）日: 2015-06-24
• 發明（設計）人: 高橋史員
• 申請（專利權）人: 花王株式會社
• 主分類號: C12N15/09
• 分類號: C12N15/09;C12N1/19;C12N5/10;C12N9/04;C12P19/00
• 代理公司: 北京尚誠知識產權代理有限公司 11322
• 代理人: 龍淳;沈央

技術領域

本發明涉及新型醇氧化酶以及編碼該醇氧化酶的基因。另外，本發明涉及使該醇氧化酶缺失等而得到的轉化體以及使用該轉化體的糖脂質的制造方法。

背景技術

作為糖脂質的一種的烷基葡萄糖苷或者槐糖脂(sophorose?lipid)是作為表面活性劑而配合于各種洗滌劑等中。

烷基葡萄糖苷或者槐糖脂的工業生產主要是以糖和醇作為原料通過化學合成來進行，但是存在需要大量原料醇，并且由于進行高溫·高壓下的反應而原料葡萄糖會改性等的問題。

從這樣的實際情況出發，尋求更高效率的生產方法，探討了使用微生物的糖脂質的制造技術。例如，已知如果在含有糖和醇的培養基中培養作為酵母的1種的假絲酵母菌(Candida?bombicola)，則作為產物可以得到烷基槐糖苷(alkyl?sophoroside)或者槐糖脂(參照專利文獻1和非專利文獻1)。

現有技術文獻

專利文獻1：美國專利第6433152號說明書

非專利文獻1：Biotechnology?Letters,Volume?20,No.3,1998,pp.215-218

發明內容

然而，使用上述微生物的制造方法雖然能夠進行常溫·常壓下的糖脂質制造，但是存在糖脂質相對于原料醇的收率非常低的問題。

在此，本發明的課題在于，提供在常溫·常壓下能夠生產率良好地制造糖脂質的微生物轉化體、以及使用該轉化體的糖脂質的制造方法。

本發明者們針對使用微生物的糖脂質的制造技術進行了專門探討，結果發現：在假絲酵母菌(Candida?bombicola)的醇代謝路徑中，有新型的醇氧化酶參與。進一步發現，用使該醇氧化酶基因的功能降低的轉化體會顯著提高糖脂質的生產率。本發明是基于這些發現完成的。

即，本發明涉及一種轉化體(以下也稱為“本發明的轉化體”)，其在具有編碼下述(a)～(c)中任一種蛋白質的基因的宿主中，該基因缺失、變異或者表達抑制，并且與該宿主相比醇氧化酶活性降低。

(a)由序列號1所表示的氨基酸序列構成的蛋白質；

(b)由與序列號1所表示的氨基酸序列具有50％以上的同一性的氨基酸序列構成，并且具有醇氧化酶活性的蛋白質；

(c)由在序列號1所表示的氨基酸序列中1個或多個氨基酸缺失、置換、插入、或者附加而成的氨基酸序列構成，并且具有醇氧化酶活性的蛋白質。

另外，本發明涉及包括下述(1)和(2)的工序的糖脂質的制造方法(以下也稱為“本發明的糖脂質的制造方法”)。

(1)在含有醇和糖的培養基中培養上述轉化體的工序；以及

(2)從所得到的培養物中采集糖脂質的工序。

另外，本發明涉及編碼上述(a)～(c)中任一種蛋白質的基因(以下也稱為“本發明的基因”)。

另外，本發明涉及上述(a)～(c)中任一種蛋白質(以下也稱為“本發明的蛋白質”)。

根據本發明，可以提供對糖脂質的高效生產有用的新型醇氧化酶以及編碼該醇氧化酶的基因。另外，根據本發明，可以提供糖脂質的生產能優異的轉化體。進一步，根據本發明，可以提供生產率優異且對糖脂質的工業生產有用的糖脂質的制造方法。

本發明的上述以及其它特征和優點通過參照適當的附圖，從下述的記載更明確。

附圖說明

[圖1]是將實施例中制作的KSM36株、NBRC10243株、KSMΔura3株中ura3基因區域的序列的一部分進行比較的圖。

[圖2]是表示將實施例中制作的KSMΔura-ura株和KSMΔAOX株改變碳源進行培養，每段培養時間的活菌數的圖。

[圖3]是表示在實施例中制作的KSMΔura-ura株和KSMΔAOX株中醇氧化酶活性的圖。

[圖4]是表示在實施例中制作的BL21(DE3)-pET-AOX株和BL21(DE3)-pET株中，表達蛋白質的檢測結果的圖。

[圖5]是表示在BL21(DE3)-pET-AOX株和BL21(DE3)-pET株中醇氧化酶活性的圖。