[發明專利]3-差向異構酶

在審

• 申請號: 201380050744.8
• 申請日: 2013-09-27
• 公開（公告）號: CN104903457A
• 公開（公告）日: 2015-09-09
• 發明（設計）人: R·D·伍德耶爾;R·W·阿門特勞特
• 申請（專利權）人: 泰特&萊爾組分美國公司;塔特和萊利技術有限公司
• 主分類號: C12P19/02
• 分類號: C12P19/02;C12P19/24;C12N9/90
• 代理公司: 北京潤平知識產權代理有限公司 11283
• 代理人: 嚴政;李婉婉

1.一種包含多肽序列的蛋白，該多肽序列與編號6的序列、編號2的序列或編號4的序列具有至少70％的序列同一性，其特征在于，該蛋白具有酮糖-3-差向異構酶活性。

2.根據權利要求1所述的蛋白，其特征在于，該多肽序列與編號6、編號2或編號4的序列具有至少80％、90％、95％或99％的序列同一性，或100％的序列同一性。

3.根據權利要求1或2所述的蛋白，其特征在于，該多肽序列包含編號13的序列。

4.根據權利要求1至3中任一項所述的蛋白，其特征在于，該蛋白固定于固相基質。

5.如前述權利要求中任一項所述的蛋白用于合成阿洛酮糖的用途。

6.一種核酸分子，所述核酸分子包含多核苷酸序列，該多核苷酸序列編碼權利要求1至4中任一項所述的蛋白。

7.根據權利要求6所述的核酸分子，該核酸分子包含多核苷酸序列，該多核苷酸序列的特征在于：

(i)與編號5、編號1或編號3的序列具有至少70％、80％、90％、95％或99％的序列同一性，或100％的序列同一性；或

(ⅱ)在高度嚴謹條件下雜交得到一種多核苷酸，該多核苷酸具有與編號5、編號1或編號3所示序列互補的序列。

8.一種載體，該載體包含根據權利要求6或7所述的核酸分子。

9.一種宿主細胞，該宿主細胞包含根據權利要求6或7所述的重組核酸分子。

10.根據權利要求9所述的宿主細胞，其中該宿主細胞是一種酵母、細菌或其他微生物，或是哺乳動物、植物或其他細胞的培養物。

11.根據權利要求10所述的宿主細胞，其中該宿主細胞為大腸桿菌。

12.根據權利要求1至4中任一項所述的蛋白制造的阿洛酮糖。

13.一種制造阿洛酮糖的方法，其特征在于，包括在可將果糖基質轉化成阿洛酮糖的條件下將根據權利要求1至4中任一項所述的蛋白與果糖基質接觸。

14.根據權利要求13所述的方法，其特征在于，該蛋白存在于宿主細胞中。

15.根據權利要求13所述的方法，其特征在于，該蛋白呈分離形式。

16.根據權利要求13-15中任一項所述的方法，其中該條件包括將蛋白和果糖基質保持在25℃至75℃之間。

17.根據權利要求13-16中任一項所述的方法，其中該條件包括將蛋白和果糖基質保持在pH?4至pH?10之間。

18.根據權利要求13-17中任一項所述的方法，其中該條件包括將果糖基質的濃度保持在75％至95％(重量/體積)之間。

19.一種核酸分子，所述核酸分子包含多核苷酸序列，所述多核苷酸序列的特征在于：

(i)與編號5、編號1或編號3的序列具有至少70％的序列同一性；或

(ⅱ)在高度嚴謹條件下雜交得到一種多核苷酸，所述多核苷酸具有與編號5、編號1或編號3所示序列互補的序列。

20.一種宿主細胞，所述宿主細胞包含重組核酸分子，該核酸分子包含多核苷酸序列，該多核苷酸序列編碼具有酮糖-3-差向異構酶活性的多肽，該多核苷酸序列其特征在于：

(i)與編號5、編號1或編號3的序列具有至少70％的序列同一性；或

(ⅱ)在高度嚴謹條件下雜交得到一種多核苷酸，該多核苷酸具有與編號5、編號1或編號3所示序列互補的序列。

21.一種載體，所述載體包含核酸分子，該核酸分子包含多核苷酸，該多核苷酸編碼具有酮糖-3-差向異構酶活性的多肽，其中該多核苷酸序列的特征在于：

(i)與編號5、編號1或編號3的序列具有至少70％的序列同一性；或

(ⅱ)在高度嚴謹條件下雜交得到一種多核苷酸，該多核苷酸具有與編號5、編號1或編號3所示序列互補的序列。

22.一種制造阿洛酮糖的方法，該方法包括以下步驟：

(ⅰ)提供一種包含核酸分子的載體，該核酸分子具有多核苷酸序列，該多核苷酸序列編碼具有酮糖-3-差向異構酶活性的蛋白，其中該多核苷酸序列的特征在于：(a)與編號5、編號1或編號3的序列具有至少70％的序列同一性；或(b)在高度嚴謹條件下雜交得到多核苷酸，該多核苷酸具有與編號5、編號1或編號3所示序列互補的序列；

(ⅱ)合成具有酮糖-3-差向異構酶活性并被多核苷酸序列編碼的蛋白；

(ⅲ)將果糖與具有酮糖-3-差向異構酶活性的蛋白接觸，并將果糖和蛋白保持在可將果糖轉化成阿洛酮糖的條件下；以及

(iv)至少對步驟(iii)所制造的阿洛酮糖進行部分純化。