[發明專利]用于改變活細胞中存在的目標RNA分子的序列的寡核苷酸

有效

• 申請號: 201380047636.5
• 申請日: 2013-07-12
• 公開（公告）號: CN104640986B
• 公開（公告）日: 2018-08-28
• 發明（設計）人: D·A·德布爾;T·里策馬
• 申請（專利權）人: ProQR治療上市公司II
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;A61K48/00;A61K31/7088
• 代理公司: 北京尚誠知識產權代理有限公司 11322
• 代理人: 龍淳

本發明涉及基因治療領域，更具體地，涉及用于改變活細胞中存在的目標RNA分子的序列的寡核苷酸。

發明領域

本發明涉及基因治療領域，更具體地，涉及用于改變活細胞中存在的目標RNA分子的序列的寡核苷酸。

背景技術

許多種遺傳病是由基因組中的突變引起的。若干類型的修飾已經發現在基因組中發生突變：一個或若干個堿基對的缺失、基因序列中的一個或若干個錯配、一個或若干個核苷酸的插入、或重復三聯體的反復以及整個或一部分基因的缺失或重復。

由一個或若干個堿基對的錯配、缺失或插入導致的遺傳病包括囊性纖維化、肌肉萎縮癥、鐮狀細胞性貧血、血友病、β-地中海貧血、脆性X綜合征。

可以利用RNA修復在RNA水平上修復遺傳缺陷。

寡核苷酸及其復合物已經被用作修復DNA修飾的治療分子(I Papaioannou,JPSimons,JS Owen,Oligonucleotide-directed gene-editing technology:mechanismsand future prospects(寡核苷酸引導的基因編輯技術：機制和未來展望),ExpertOpin.Biol.Ther.(2012)12(3):329-342)。這些寡聚物可以包含RNA和/或DNA核苷酸、或修飾的RNA或DNA核苷酸。采用它們獲得缺陷DNA的位點特異性修復。預期修復在識別出引入的錯配之后通過內源性DNA修復機制的激活進行。

形成三聯體的寡核苷酸也已經被用作基因靶向的序列特異性工具。形成三聯體的寡核苷酸在雙鏈體DNA的大溝中以高親和力結合。由于該特性，已經提出將形成三聯體的寡核苷酸作為位點特異性修正靶向基因的工具(Knauert等人,Hum Mol Genet.(2001)10,2243-2251；Richardson等人,Drug Target(2002)10,133-134；Thoung等人,(1993)Angewandte Chemie.Intl.Ed.Eng.,32,666-690.)。目前的靶向基因修復方法不是非常有效，而且/或者尚未證實在活細胞中原位發揮作用，為修復基因缺陷的其他機制留下空間。

RNA水平上缺陷基因的修復已見諸報道。例如，采用通過雙鏈寡核苷酸復合物的mRNA特定修復在體外在ΔF508CFTR mRNA中插入核苷酸。介導該過程的機制假定是RNA酶H介導的降解，然后是RNA修復(PC Zamecnik,MK Raychowdhury,DR Tabatadze,HFCantiello Reversal of cystic fibrosis phenotype in a culturedΔF508cysticfibrosis transmembrane conductance regulator cell line by oligonucleotideinsertion (通過寡核苷酸插入在培養的ΔF508囊性纖維化跨膜傳導調節因子細胞系中逆轉囊性纖維化表型),Proc Natl Acad Sci 2004101(21)8150-8155；WO2005094370,oligonucleotide complex compositions and methods of use as gene alterationtools(寡核苷酸復合物組合物及其用作基因變更工具的方法))。

發明內容