[發(fā)明專利]用于改變活細(xì)胞中存在的目標(biāo)RNA分子的序列的寡核苷酸

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201380047636.5
• 申請(qǐng)日: 2013-07-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104640986B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-08-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: D·A·德布爾;T·里策馬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: ProQR治療上市公司II
• 主分類號(hào): C12N15/11
• 分類號(hào): C12N15/11;A61K48/00;A61K31/7088
• 代理公司: 北京尚誠(chéng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11322
• 代理人: 龍淳

本發(fā)明涉及基因治療領(lǐng)域，更具體地，涉及用于改變活細(xì)胞中存在的目標(biāo)RNA分子的序列的寡核苷酸。

發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因治療領(lǐng)域，更具體地，涉及用于改變活細(xì)胞中存在的目標(biāo)RNA分子的序列的寡核苷酸。

背景技術(shù)

許多種遺傳病是由基因組中的突變引起的。若干類型的修飾已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在基因組中發(fā)生突變：一個(gè)或若干個(gè)堿基對(duì)的缺失、基因序列中的一個(gè)或若干個(gè)錯(cuò)配、一個(gè)或若干個(gè)核苷酸的插入、或重復(fù)三聯(lián)體的反復(fù)以及整個(gè)或一部分基因的缺失或重復(fù)。

由一個(gè)或若干個(gè)堿基對(duì)的錯(cuò)配、缺失或插入導(dǎo)致的遺傳病包括囊性纖維化、肌肉萎縮癥、鐮狀細(xì)胞性貧血、血友病、β-地中海貧血、脆性X綜合征。

可以利用RNA修復(fù)在RNA水平上修復(fù)遺傳缺陷。

寡核苷酸及其復(fù)合物已經(jīng)被用作修復(fù)DNA修飾的治療分子(I Papaioannou,JPSimons,JS Owen,Oligonucleotide-directed gene-editing technology:mechanismsand future prospects(寡核苷酸引導(dǎo)的基因編輯技術(shù)：機(jī)制和未來(lái)展望),ExpertOpin.Biol.Ther.(2012)12(3):329-342)。這些寡聚物可以包含RNA和/或DNA核苷酸、或修飾的RNA或DNA核苷酸。采用它們獲得缺陷DNA的位點(diǎn)特異性修復(fù)。預(yù)期修復(fù)在識(shí)別出引入的錯(cuò)配之后通過(guò)內(nèi)源性DNA修復(fù)機(jī)制的激活進(jìn)行。

形成三聯(lián)體的寡核苷酸也已經(jīng)被用作基因靶向的序列特異性工具。形成三聯(lián)體的寡核苷酸在雙鏈體DNA的大溝中以高親和力結(jié)合。由于該特性，已經(jīng)提出將形成三聯(lián)體的寡核苷酸作為位點(diǎn)特異性修正靶向基因的工具(Knauert等人,Hum Mol Genet.(2001)10,2243-2251；Richardson等人,Drug Target(2002)10,133-134；Thoung等人,(1993)Angewandte Chemie.Intl.Ed.Eng.,32,666-690.)。目前的靶向基因修復(fù)方法不是非常有效，而且/或者尚未證實(shí)在活細(xì)胞中原位發(fā)揮作用，為修復(fù)基因缺陷的其他機(jī)制留下空間。

RNA水平上缺陷基因的修復(fù)已見(jiàn)諸報(bào)道。例如，采用通過(guò)雙鏈寡核苷酸復(fù)合物的mRNA特定修復(fù)在體外在ΔF508CFTR mRNA中插入核苷酸。介導(dǎo)該過(guò)程的機(jī)制假定是RNA酶H介導(dǎo)的降解，然后是RNA修復(fù)(PC Zamecnik,MK Raychowdhury,DR Tabatadze,HFCantiello Reversal of cystic fibrosis phenotype in a culturedΔF508cysticfibrosis transmembrane conductance regulator cell line by oligonucleotideinsertion (通過(guò)寡核苷酸插入在培養(yǎng)的ΔF508囊性纖維化跨膜傳導(dǎo)調(diào)節(jié)因子細(xì)胞系中逆轉(zhuǎn)囊性纖維化表型),Proc Natl Acad Sci 2004101(21)8150-8155；WO2005094370,oligonucleotide complex compositions and methods of use as gene alterationtools(寡核苷酸復(fù)合物組合物及其用作基因變更工具的方法))。

發(fā)明內(nèi)容