[發明專利]使用小分子從多能干細胞產生胰內胚層

有效

• 申請號: 201380045948.2
• 申請日: 2013-09-03
• 公開（公告）號: CN104903440B
• 公開（公告）日: 2018-04-06
• 發明（設計）人: J.埃克伯格;M.漢斯森;U.多恩;K.赫斯;N.富納
• 申請（專利權）人: 諾和諾德股份有限公司;寶生物工程歐洲股份公司
• 主分類號: C12N5/074
• 分類號: C12N5/074
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司72001
• 代理人: 黃登高,徐厚才

1.產生表達至少5% PDX1/NKX6.1雙陽性的胰細胞或胰細胞前體的方法，包括將定形內胚層細胞暴露于有效量的下列各組化合物中的各至少一種：

a. BMP抑制劑，和

b. 激酶抑制劑，和

c. 視黃酸受體激動劑，

以使定形內胚層細胞分化為胰細胞或胰細胞前體，

其中所述激酶抑制劑為JNK抑制劑II并且與視黃酸受體激動劑AM580組合，其中所述JNK抑制劑II為具有或不具有N-烷基化的1,9-吡唑并蒽酮的異構體或互變異構體。

2.權利要求1的方法，其中所述BMP抑制劑為LDN-193189。

3.權利要求1的方法，其中所述激酶抑制劑和視黃酸受體激動劑與bFGF組合。

4.權利要求1的方法，其中所述激酶抑制劑和視黃酸受體激動劑與FGF7或FGF10組合。

5.權利要求1的方法，包括將定形內胚層細胞暴露于有效量的無bFGF的LDN-193189的第一步驟，和在bFGF存在下暴露于JNK抑制劑II與AM580組合的第二步驟。

6.權利要求1的方法，包括將定形內胚層細胞暴露于有效量的LDN-193189，隨后暴露于由以下組成的組中的至少一種化合物：

wnt抑制劑，和/或

hedgehog抑制劑。

7.權利要求6的方法，其中所述wnt抑制劑為IWP2。

8.權利要求6的方法，其中所述hedgehog抑制劑為環巴胺。

9.權利要求1-8中任一項的方法，其中所述胰細胞或胰細胞前體為至少5%PDX1/NKX6.1雙陽性。

10.權利要求1-8中任一項的方法，其中所述胰細胞或胰細胞前體為至少10%PDX1/NKX6.1雙陽性。

11.權利要求1-8中任一項的方法，其中所述胰細胞或胰細胞前體為10-30%PDX1/NKX6.1雙陽性。

12.權利要求1-8中任一項的方法，其中所述胰細胞或胰細胞前體為10-40%PDX1/NKX6.1雙陽性。

13.權利要求1-8中任一項的方法，其中所述胰細胞或胰細胞前體為5-70%PDX1/NKX6.1雙陽性。

14.權利要求1-8中任一項的方法，其中所述胰細胞或胰細胞前體為10-80%PDX1/NKX6.1雙陽性。

15. 權利要求1-8中任一項的方法，其中所述胰細胞或胰細胞前體為5-100% PDX1/NKX6.1雙陽性。

16.產生胰細胞或胰細胞前體的方法，其將定形內胚層細胞體外暴露于靶向JNK1、2或3的激酶抑制劑而產生，其中所述靶向JNK1、2或3的激酶抑制劑為JNK抑制劑II。

17.權利要求16的方法，其中定形內胚層細胞還暴露于下列化合物的至少一種：

LDN-193189，

Wnt抑制劑，

hedgehog抑制劑，

視黃酸受體激動劑；

其中所述JNK抑制劑II為具有或不具有N-烷基化的1,9-吡唑并蒽酮的異構體或互變異構體。

18.權利要求16的方法，其中將定形內胚層細胞暴露于JNK抑制劑II與表2中所列視黃酸受體激動劑的組合，其中所述JNK抑制劑II為具有或不具有N-烷基化的1,9-吡唑并蒽酮的異構體或互變異構體。

19.JNK抑制劑II化合物從胰內胚層前體誘導胰細胞或胰細胞前體的用途，其中所述JNK抑制劑II為具有或不具有N-烷基化的1,9-吡唑并蒽酮的異構體或互變異構體。

20.JNK抑制劑II和LDN-193189組合從胰內胚層前體誘導胰細胞或胰細胞前體的用途，其中所述JNK抑制劑II為具有或不具有N-烷基化的1,9-吡唑并蒽酮的異構體或互變異構體。

21.JNK抑制劑II與視黃酸受體激動劑組合從胰內胚層前體誘導胰細胞或胰細胞前體的用途，其中所述JNK抑制劑II為具有或不具有N-烷基化的1,9-吡唑并蒽酮的異構體或互變異構體。