[發(fā)明專利]熒光融合多肽、包含所述多肽的生物感應(yīng)器及其用途有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201380045944.4 | 申請(qǐng)日： | 2013-07-08 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN104781667B | 公開（公告）日： | 2017-06-13 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 丹尼爾·科塔薩爾-薩巴拉;艾達(dá)-克拉麗莎·薩拉多-波貢扎;喬治·加米斯-馬塔;梅瑞特謝爾·羅拉-費(fèi)勒;羅莎·麥拉-洛佩斯;帕特麗夏·維拉斯-洛扎諾 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 生物系統(tǒng)技術(shù)創(chuàng)新公司 |
| 主分類號(hào)： | C07K14/47 | 分類號(hào)： | C07K14/47 |
| 代理公司： | 廣州華進(jìn)聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司44224 | 代理人： | 黎艷,萬志香 |
| 地址： | 西班牙*** | 國(guó)省代碼： | 暫無信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 熒光 融合 多肽 包含 生物 感應(yīng)器 及其 用途 | ||
1.一種熒光融合多肽，能夠在細(xì)胞質(zhì)中的第二信使?jié)舛仍黾訒r(shí)，將自己在細(xì)胞中的定位從細(xì)胞質(zhì)膜轉(zhuǎn)移至滯留囊泡中，所述多肽包括膜定位肽、第二信使轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白結(jié)合肽、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留信號(hào)和熒光肽，其中：
a.所述膜定位肽位于所述熒光融合多肽的N端，且物理性地連接在所述熒光肽上，該連接通過連接子實(shí)現(xiàn)；而所述熒光肽物理性地連接在所述第二信使轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白結(jié)合肽上，該連接通過連接子實(shí)現(xiàn)；以及
b.所述第二信使轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白結(jié)合肽物理性地連接在所述內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留信號(hào)上，該連接通過連接子實(shí)現(xiàn)，而所述內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留信號(hào)位于所述熒光融合多肽的C端；其中，所述膜定位肽是指其天然胞內(nèi)定位位于質(zhì)膜中的肽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光融合多肽，其特征在于，所述多肽能夠在細(xì)胞質(zhì)中的第二信使?jié)舛仍黾訒r(shí)將自己在細(xì)胞中的定位從細(xì)胞質(zhì)膜轉(zhuǎn)移至滯留囊泡中，且所述第二信使選自：鈣、cAMP或甘油二酯。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的熒光融合多肽，其特征在于：
a.所述膜定位肽是如SEQ ID No 17所示的白細(xì)胞介素-2受體的胞外域；以及
b.所述內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留信號(hào)是選自KDEL、HDEL、KKXX、KXKXX和RXR的多肽，其中X為任意氨基酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的熒光融合多肽，其特征在于，
a.所述膜定位肽是如SEQ ID NO 17所示的白細(xì)胞介素-2受體的胞外域；以及
b.所述內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留信號(hào)是KDEL。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光融合多肽，其特征在于，所述多肽能夠在胞內(nèi)鈣濃度增加時(shí)，將自己在細(xì)胞中的定位從細(xì)胞質(zhì)膜轉(zhuǎn)移至滯留囊泡中，且所述第二信使轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白結(jié)合肽包括鈣調(diào)素結(jié)合序列。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的熒光融合多肽，其特征在于，所述鈣調(diào)素結(jié)合序列選自SEQ ID No 1、SEQ ID No 2、SEQ ID No 3、SEQ ID No 4、SEQ ID No 5、SEQ ID No 6、SEQ ID No 7和SEQ ID No 8。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的熒光融合多肽，其特征在于，所述內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留信號(hào)為KDEL。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的熒光融合多肽，其特征在于，所述膜定位肽是如SEQ ID NO 17所示的白細(xì)胞介素-2受體的胞外域。
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的熒光融合多肽，其特征在于，所述熒光肽選自GFP、YFP、turboGFP、tRFP和tRFP602。
10.根據(jù)權(quán)利要求5所述的熒光融合多肽，其特征在于，
a.所述鈣調(diào)素結(jié)合序列選自：SEQ ID No 1、SEQ ID No 2、SEQ ID No 3、SEQ ID No 4、SEQ ID No 5、SEQ ID No 6、SEQ ID No 7和SEQ ID No 8；
b.所述膜定位肽是如SEQ ID NO 17所示的白細(xì)胞介素-2受體的胞外域；以及
c.所述內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留信號(hào)為KDEL。
11.根據(jù)權(quán)利要求5所述的熒光融合多肽，其特征在于，所述多肽包含SEQ ID No 15。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光融合多肽，其特征在于，所述多肽能夠在胞內(nèi)cAMP濃度增加時(shí)，將自己在細(xì)胞中的定位從細(xì)胞質(zhì)膜轉(zhuǎn)移至滯留囊泡中，且所述第二信使轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白結(jié)合肽包含與PKA的RI和RII調(diào)控域結(jié)合的結(jié)合序列。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的熒光融合多肽，其特征在于，所述與PKA的RI和RII調(diào)控域結(jié)合的結(jié)合序列選自：SEQ ID No 9、SEQ ID No 10、SEQ ID No 11、SEQ ID No 12、SEQ ID No 13和SEQ ID No 14。
14.根據(jù)權(quán)利要求12或13所述的熒光融合多肽，其特征在于，所述內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留信號(hào)為KDEL。
15.根據(jù)權(quán)利要求12所述的熒光融合多肽，其特征在于，所述膜定位肽為白細(xì)胞介素-2受體的胞外 域。
16.根據(jù)權(quán)利要求10所述的熒光融合多肽，其特征在于，所述熒光肽選自：GFP、YFP、turboGFP、tRFP和tRFP602。
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