[發(fā)明專利]制備患者特異性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤動物模型的方法及其用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201380044503.2
• 申請日: 2013-06-21
• 公開（公告）號: CN104582477B
• 公開（公告）日: 2018-09-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 南都鉉;秦州酀;朱景敏
• 申請（專利權(quán)）人: 社會福祉法人三星生命公益財(cái)團(tuán)
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027;G01N33/15;C12N15/09
• 代理公司: 北京坤瑞律師事務(wù)所 11494
• 代理人: 陳桉

本發(fā)明涉及膠質(zhì)母細(xì)胞瘤小鼠模型的生產(chǎn)方法，包括步驟：(a)將分離自患者的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤組織分開成4個或更多部分，從每個部分收集1個或更多碎塊；(b)將收集的多個碎塊的混合物解離為單細(xì)胞形式的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞；和(c)將包含在步驟(b)中獲得的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的移植物樣品原位移植到免疫缺陷小鼠的腦中。本發(fā)明還涉及通過該方法生產(chǎn)出的小鼠模型，應(yīng)用該小鼠模型篩選膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的治療劑的方法；和應(yīng)用該小鼠模型為選擇患者特異性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤療法而提供信息的方法。根據(jù)本發(fā)明的患者特異性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤小鼠模型顯示出與親本腫瘤相同的遺傳、形態(tài)學(xué)和病理學(xué)性狀，從而使得篩選患者特異性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤治療劑或選擇更為安全有效的患者特異性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤治療方法成為可能。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生產(chǎn)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤小鼠模型的方法，包括步驟：(a)將分離自患者的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤組織分開成4個或更多部分(sections)，從每個部分收集1個或更多碎塊；(b)將收集的多個碎塊的混合物解離為單細(xì)胞形式的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞；和(c)將包含在步驟(b)中獲得的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的移植物樣品原位移植到免疫缺陷小鼠的腦中；本發(fā)明涉及通過該方法制造出的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤小鼠模型；應(yīng)用該小鼠模型篩選膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的治療劑的方法；和應(yīng)用該小鼠模型為患者特異性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤療法的選擇提供信息的方法。

背景技術(shù)

神經(jīng)膠質(zhì)瘤是在原發(fā)腦腫瘤中占約60％的惡性腫瘤，發(fā)生率高而且難以治療。如此，尚未報(bào)道除了放射療法之外的其他對于神經(jīng)膠質(zhì)瘤的有效治療方法。在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中，膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(GBM)作為最惡性的類型較之其他癌對放射療法和化學(xué)療法有非常高的抵抗性，因而膠質(zhì)母細(xì)胞瘤確診后的預(yù)期壽命僅有一年。然而，就腦腫瘤來說，治療藥物的遞送由于血-腦屏障的存在而不簡單。特別地，因?yàn)閷τ谀X神經(jīng)生物學(xué)的了解不足，導(dǎo)致對治療劑的開發(fā)進(jìn)展緩慢。進(jìn)一步地，膠質(zhì)母細(xì)胞瘤相比于其他腦腫瘤表現(xiàn)出浸潤性變異，因此如果不在短期內(nèi)采取治療可在數(shù)星期內(nèi)致死。除外科手術(shù)治療外，對膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的治療還有放射療法和化學(xué)療法。然而，化學(xué)療法由于抗性突變體的出現(xiàn)、由腫瘤干細(xì)胞導(dǎo)致的復(fù)發(fā)等已達(dá)到其局限性，因此需要開發(fā)新的療法。

最近幾年中，隨著系統(tǒng)生物學(xué)和生物信息學(xué)工具的迅猛發(fā)展，已經(jīng)報(bào)道了被認(rèn)為與膠質(zhì)母細(xì)胞瘤發(fā)生和進(jìn)展相關(guān)的遺傳缺陷和基因表達(dá)模式。然而，可以表示臨床結(jié)果的分子標(biāo)記的篩選仍然不足。特別地，基因表達(dá)分析在轉(zhuǎn)錄水平執(zhí)行，因此不能反映在實(shí)際腫瘤組織中的蛋白表達(dá)水平。作為解決該問題的方法，已提出了最佳模擬膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的動物模型的應(yīng)用。該動物模型可以被應(yīng)用于研究膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的發(fā)生和進(jìn)展。進(jìn)一步地，其可被應(yīng)用于考察對于膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的新的治療策略和研究已有治療策略的適當(dāng)聯(lián)用。此外，其還被預(yù)期應(yīng)用于檢查對于膠質(zhì)母細(xì)胞瘤顯示出有治療效果的新抗腫瘤物質(zhì)的效果。

相應(yīng)地，諸如裸鼠的免疫受損模型動物已被使用，或已經(jīng)積極地進(jìn)行研究以開發(fā)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤誘導(dǎo)的動物模型。例如，有報(bào)道通過移植人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤產(chǎn)生動物模型(DiaoYi等人,Cancer Investigation,29:229–239,2011,EGFR Gene Overexpression Retainedin an Invasive Xenograft Model by Solid Orthotopic Transplantation of HumanGlioblastoma Multiforme Into Nude Mice)。在上述文獻(xiàn)中，通過使用從獲自患者的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的一個特定部分(單個部分)的碎塊所制備的移植物樣品產(chǎn)生小鼠模型，從而在生產(chǎn)具有與親本腫瘤相同的遺傳、形態(tài)學(xué)和病理學(xué)性狀的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤小鼠模型方面存在困難。此外，在按照現(xiàn)有技術(shù)制備移植入小鼠的移植物樣品的樣品制備過程中，使用蛋白酶對收集自患者的組織進(jìn)行酶分解，但是在此情形中，由于組織黏度，將組織分離成單個細(xì)胞存在困難。此外，F(xiàn)icoll梯度分離法被普遍應(yīng)用到從收集自患者的移植物樣品中去除紅細(xì)胞，但是在此情形中的問題在于紅細(xì)胞被清除的效力低。