[發(fā)明專利]減毒的豬流感疫苗及其制備和使用方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201380043383.4
• 申請日: 2013-07-11
• 公開（公告）號: CN104582725B
• 公開（公告）日: 2017-06-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: B·M·豪斯
• 申請（專利權(quán)）人: 梅里亞股份有限公司
• 主分類號: A61K39/145
• 分類號: A61K39/145;C12N7/00;A61P31/04
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進委員會專利商標事務(wù)所11038
• 代理人: 袁泉

通過引用并入

本申請要求于2012年7月17日提交的臨時申請USSN 61/672,398的優(yōu)先權(quán)，且通過引用將其整體并入本文。

發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明一般涉及減毒的病毒疫苗，特別是對豬提供抵抗由豬流感引起的感染/疾病的廣泛、安全和有效保護的那些疫苗。本發(fā)明進一步涉及產(chǎn)生減毒病毒的方法，以及與減毒病毒的毒力減少相關(guān)的核酸變異的鑒定。

本發(fā)明相應(yīng)地涉及包含本發(fā)明的病毒例如減毒活病毒的免疫原性組合物或疫苗組合物。病毒還可以在組合物中被滅活；但病毒是減毒的活豬流感可以是有利的。本發(fā)明因此進一步涉及用于制備和/或配制此類組合物的方法；例如在合適培養(yǎng)基上或中培養(yǎng)或生長或繁殖病毒，收獲病毒，任選地滅活病毒，且任選地與合適的獸醫(yī)學(xué)或藥學(xué)可接受的運載體、賦形劑、稀釋劑或媒介物和/或佐劑和/或穩(wěn)定劑混合。因此，本發(fā)明還涉及病毒在配制此類組合物中的用途。

發(fā)明背景

流感病毒具有逃避針對介導(dǎo)病毒進入的血凝素的(HA)的宿主體液免疫的許多機制。基因組區(qū)段的重排可以導(dǎo)致抗原轉(zhuǎn)換，同時突變的逐步累積導(dǎo)致遺傳漂變(Desselberger U等人，1978，Schild G等人，1974)。除了可以影響預(yù)先存在的抗體識別突變型HA的能力的HA抗原性表位中的突變之外，HA的N聯(lián)糖基化中的突變可以通過改變圍繞HA的寡糖層來促進抗體識別的病毒逃避(Schulze IT，1997)。聚糖殘基可以限制一些抗體與其表位的結(jié)合，導(dǎo)致在稱為聚糖屏蔽的現(xiàn)象中的抗體識別和免疫原性的喪失(Wanzeck K等人，2011，Wei C-J等人，2010)。另外，突變和遺傳漂變優(yōu)先在不受聚糖保護的HA球狀頭部中的位置處發(fā)生(Das SR等人，2010)。聚糖殘基還影響受體結(jié)合且因此可以影響病毒復(fù)制動力學(xué)。

流感病毒的進化經(jīng)常包括糖基化位點的數(shù)目和位置的修飾(Long J等人，2011)。對于H3N2病毒，糖基化位點的數(shù)目在過去40年已從兩個增加到十個(4)。然而，增加糖基化的HA已與小鼠中的毒力減少和降低的病毒適合度關(guān)聯(lián)(Das SR等人，2011，Vigerust DJ等人，2007)。雖然增加糖基化可以使HA屏蔽中和抗體，但關(guān)于細胞受體的病毒親和力強制性減少(Abe Y等人，2004，Das SR等人，2011)。此外，需要HA或神經(jīng)氨酸酶(NA)中的代償突變以平衡受體結(jié)合和釋放活性(Wagner R等人，2000)。NA中的這些補償突變已與對NA抑制劑的天然抗性的獲得相關(guān)(Hensley SE等人，2011)。

豬流感病毒的眾多遺傳和抗原上不同的譜系同時在豬中循環(huán)，包括β、γ和δ-簇H1N1和H1N2病毒，以及H3N2亞型(Lorusso A等人，2012)。δ-簇最初再分成兩個亞簇(δ-I和δ-II)，然而，最近的工作證實代表至少三個抗原上不同的組的五個不同遺傳亞簇(δ-A、δ-B、δ-C、δ-D、δ-E)(Hause BM等人，2011，Vincent AL等人，2009)。

雖然當疫苗株匹配野外攻擊病毒時，被殺死的病毒疫苗是有效的，但流感的快速突變率需要頻繁毒株變化，以確保在疫苗株和循環(huán)病毒之間的遺傳和抗原匹配。另外，豬中共循環(huán)的多重亞型和譜系經(jīng)常要求五種或更多種疫苗株，以便包括每個類型的代表。引發(fā)廣譜免疫的單一活疫苗提供在豬衛(wèi)生計劃中的顯著進展。

發(fā)明概述

本發(fā)明的目的是提供減毒疫苗以及治療和預(yù)防豬流感的感染的方法。

在一個實施方案中，疫苗包含減毒的流感病毒，其已經(jīng)修飾為表達相對于其親本株具有另外糖基化位點的HA基因。

在特定實施方案中，HA基因和/或基因產(chǎn)物具有與SEQ ID NOs:17和21；SEQ ID NOs:17和23；SEQ ID NOs:18和22；或SEQ ID NOs:18和24之間存在的相同的修飾。在另外一個實施方案中，HA基因和/或基因產(chǎn)物具有5種修飾中的至少1種。在更特定的實施方案中，HA基因和/或基因產(chǎn)物具有4或5種修飾，導(dǎo)致相對于親本HA基因產(chǎn)物的+4和+5個糖基化位點。

本發(fā)明的另一個目的是提供用于反向遺傳學(xué)系統(tǒng)中的cDNA和/或質(zhì)粒，用于產(chǎn)生根據(jù)本公開內(nèi)容的減毒流感。在一個實施方案中，cDNA和/或質(zhì)粒中的至少一種包含相對于如SEQ ID NO:18所示的序列具有增加數(shù)目的糖基化位點的HA序列。