[發明專利]人乳頭瘤病毒病毒樣顆粒的高效提純方法

有效

• 申請號: 201380040425.9
• 申請日: 2013-07-30
• 公開（公告）號: CN104507956B
• 公開（公告）日: 2018-11-06
• 發明（設計）人: 金洪珍;金亨真
• 申請（專利權）人: 普瓦絲株式會社
• 主分類號: C07K1/16
• 分類號: C07K1/16;C07K14/025
• 代理公司: 北京德崇智捷知識產權代理有限公司 11467
• 代理人: 王金雙

1.一種提純人乳頭瘤病毒（HPV）L1蛋白的方法，包含：

（i）培養表達HPV L1蛋白的轉化的宿主細胞，收獲所培養的宿主細胞并破碎所述細胞；

（ii）將還原劑添加至宿主細胞的勻漿；

（iii）將上述添加還原劑的宿主細胞的勻漿在25至80℃下加熱10分鐘至72小時后在0至10℃下冷卻30分鐘至3小時；和

（iv）通過對加熱和冷卻的宿主細胞的勻漿執行第一層析來提純HPV L1蛋白；

（v）對第一層析的洗脫部分執行第二層析來清除污染物質；和

（vi）將上述清除了污染物質的HPV L1蛋白質以病毒樣顆粒的形態回收。

2. 根據權利要求1所述的方法，其中HPV選自由HPV6a型、HPV 6b型、HPV 11型、HPV 16型、HPV 18型、HPV 30型、HPV 31型、HPV 33型、HPV 35型、HPV 39型、HPV 41型、HPV 42型、HPV 43型、HPV 44型、HPV 45型、HPV 51型、HPV 52型、HPV 54型、HPV 55型、HPV 56型、HPV58型、HPV 68型和HPV 70型構成的組。

3.根據權利要求1所述的方法，其中宿主細胞為細菌、酵母細胞、昆蟲細胞、植物細胞或動物細胞。

4.根據權利要求3所述的方法，其中酵母細胞為釀酒酵母、畢赤酵母或多形漢遜酵母。

5. 根據權利要求1所述的方法，其中還原劑選自由β-巰基乙醇、二硫蘇糖醇(DTT)、2-巰基乙胺-HCl、 三(2-羧乙基)磷化氫(TCEP)或半胱氨酸-HCl構成的組。

6.根據權利要求1所述的方法，其中還原劑為β-巰基乙醇或二硫蘇糖醇。

7.根據權利要求6所述的方法，其中β-巰基乙醇被添加至宿主細胞的勻漿至具有0.1wt%或更高的最終濃度。

8.根據權利要求6所述的方法，其中二硫蘇糖醇被添加至宿主細胞的勻漿至具有2mM或更高的最終濃度。

9.根據權利要求1所述的方法，其中所述層析為離子交換層析、肝素層析或親和層析。