[發(fā)明專利]磨光白蛋白的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201380039793.1
• 申請日: 2013-07-26
• 公開（公告）號: CN104507954B
• 公開（公告）日: 2017-09-08
• 發(fā)明（設計）人: K·B·麥克卡恩;J·比爾特里尼
• 申請（專利權）人: 杰特有限公司
• 主分類號: C07K1/16
• 分類號: C07K1/16;C07K14/76;A61K38/38
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進委員會專利商標事務所11038
• 代理人: 唐偉杰

技術領域

本發(fā)明一般涉及從溶液中純化白蛋白的方法。更具體地，本發(fā)明涉及通過疏水性電荷-感應色譜樹脂磨光富含白蛋白的溶液的方法。

背景

大部分商品人血清(HSA)使用基于最初由Cohn等人[1946]研發(fā)的那些乙醇沉淀法和隨后Kistler & Nitschmann的改進[1962]制備。使用這些方法分離基于血漿蛋白在不同乙醇濃度、pH、離子強度和溫度下的溶解度。然而，用于純化白蛋白的Cohn純化方法的主要缺陷在于應用高達40％v/v的乙醇濃度并且需要在低于0℃的溫度下進行操作。盡管如此，但是通過乙醇沉淀連續(xù)成功地進行白蛋白純化主要歸因于如下事實：這些方法在加工現(xiàn)代血漿分級分離方法中遇到的大體積時極為有效。

較少、但遞增量的白蛋白目前使用色譜法作為最初乙醇分級分離后的最終磨光步驟[More & Harvey,1991]或完全整合的色譜法[Marrs,1993；Yap等人,1993；Martins等人,2011；Berglof等人,1983]分級分離。HSA的色譜純化具有大量有益性，包括較高收率、較高純度[More & Harvey,1991；Yap等人,1993；Véron等人,1993]。較低的聚集性和改善的耐受性和臨床安全性[Che等人,2006]，例如，最初由Berglof等人[1983]研發(fā)的色譜法開始應用于上清液II+III進料液流并且包括應用兩種離子交換和大小排阻柱。該方法隨后適用于脫脂質(zhì)化的上清液I進料液流以調(diào)節(jié)高IgG，產(chǎn)生用于Intragam P的色譜法[Yap等人,1993；Bertolini等人,1999]。

盡管存在這些有益性，但是用于人白蛋白分級分離的色譜法的廣泛適用性有限，這歸因于在工業(yè)化規(guī)模上與這些方法操作相關的無效性。此外，用于例如Berglof等人[1983]報道的這樣的方法陰離子和陽離子交換色譜步驟涉及俘獲/結合白蛋白至樹脂。白蛋白與陰離子和陽離子交換柱的正結合是指蛋白質(zhì)載量限于≤100g/L。這在工業(yè)化應用方面存在局限，原因在于人血漿包含白蛋白作為主要蛋白質(zhì)(約占總蛋白的60-70％)且白蛋白的色譜純化由此需要較大的柱(≥200L)和多次循環(huán)。對于使用凝膠過濾步驟最終磨光HSA以除去高分子量雜質(zhì)蛋白的全色譜法而言，這尤其是顯而易見的。維持有效分離所需的低流速和小樣品載量使得該步驟成為色譜白蛋白制備方法中的顯著瓶頸。

本發(fā)明通過提供用于磨光富含白蛋白溶液的更有效方法解決或至少部分緩解了本領域中的問題。

發(fā)明概述

在本發(fā)明的一個方面中，提供了磨光白蛋白以除去污染物的方法，包括使富含白蛋白的溶液通過疏水性電荷-感應色譜樹脂并且回收通過該樹脂的白蛋白溶液。

在一個實施方案中，所述疏水性電荷-感應色譜樹脂包含4-巰基乙基吡啶。

在一個實施方案中，富含白蛋白的溶液選自Cohn上清液I、Cohn上清液II+III、來自Kistler-Nitschmann的上清液或濾液、Cohn上清液IV和Cohn級分V。在一個實施方案中，富含白蛋白的溶液是滲濾的Cohn上清液I。在一個實施方案中，來自Kistler-Nitschmann的上清液或濾液是上清液/濾液A或B。

在一個實施方案中，富含白蛋白的溶液是在血漿或滲濾的Cohn上清液I就白蛋白而言以負模式通過膨脹床吸附樹脂時回收的流過的溶液。

在一個實施方案中，富含白蛋白的溶液是脫脂質(zhì)化的和優(yōu)球蛋白耗盡的。

在一個實施方案中，在富含白蛋白的溶液通過疏水性電荷-感應色譜樹脂前，所述方法包含如下步驟：(a)使所述溶液就白蛋白而言以負模式通過陰離子交換樹脂；和(b)使所述溶液就白蛋白而言以負模式通過陽離子交換樹脂。在一個實施方案中，所述方法包含使來自步驟(a)的陰離子交換樹脂的級分流過步驟(b)中的陽離子交換樹脂。在另一個實施方案中，所述方法包含使來自步驟(b)的陽離子交換樹脂的級分流過步驟(a)中的陰離子交換樹脂。

在一個實施方案中，所述方法包含對磨光的白蛋白溶液進行巴氏滅菌。

在本發(fā)明的另一個方面中，提供了通過本文公開的方法回收的磨光的白蛋白溶液。

在本發(fā)明的另一個方面中，提供了通過本文公開的方法生產(chǎn)的巴氏滅菌的白蛋白溶液。

在本發(fā)明的另一個方面中，提供了包含磨光的白蛋白溶液并且具有小于5NTU的濁度的組合物。在一個實施方案中，該組合物包含：

(a)大于80mM的鈉；

(b)大于19％w/v的白蛋白；