[發明專利]新型肽標簽以及其用途

在審

• 申請號: 201380038732.3
• 申請日: 2013-06-20
• 公開（公告）號: CN105636976A
• 公開（公告）日: 2016-06-01
• 發明（設計）人: 夫盛熙;韓胎龍;金兌林;徐胄源;梁勝煥
• 申請（專利權）人: 慶熙大學校產學協力團;明知大學校產學協力團
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K7/08;C07K14/195;C12N15/31;C12N15/63;C07K19/00;G01N33/68
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 呂琳;劉明海

技術領域

本發明涉及一種用于目的蛋白質的檢測或純化的表位(epitope)標記系統，更詳 細的說，涉及一種源自作為耐輻射球菌(Deinococcusradiodurans)的感光蛋白質 (photoreceptorprotein)的細菌光敏色素(Bacteriophytochrome，BphP)的新型肽標簽， 以及能夠特異地識別上述肽標簽的抗體及能夠產生上述抗體的雜交瘤細胞株。并且，本發 明還涉及編碼上述肽標簽的多核苷酸；涉及包括上述多核苷酸的載體或轉化體；以及包括 上述肽標簽的融合蛋白質及用于制備、檢測或純化上述融合蛋白質的方法和試劑盒。

背景技術

有用的蛋白質或多肽可通過合成產生或者可以從天然供給源中分離。但是，這種 方法存在在費用、時間方面并不經濟，且生產量有限的缺點。因此，優選通過對重組制備的 轉化體進行培養而生產目的蛋白質和目的多肽，其中上述重組是為使目的蛋白質或目的多 肽過表達而進行的。但是，在細胞環境中產生的多肽(特別是短的多肽)由于存在于細胞的 蛋白酶的作用而易降解(degradation)，而且，并不是所有目的蛋白質都有抗體，因此不易 純化沒有對應抗體的目的蛋白質。

為了克服這些問題使用了蛋白質標記或表位標記。蛋白質標記(protein tagging)或者表位標記(epitopetagging)是制備將表位標記的編碼序列連接于目的蛋白 質的編碼序列的重組核酸分子后，使其在合適的宿主細胞中表達，再利用對應于表位標記 的抗體對目的蛋白質進行檢測、定量、純化或在目的蛋白質的細胞內追蹤位置，功能鑒定等 的一種重組DNA方法。商業上有很多表位標簽和作為其相應配體的抗體，當選擇合適抗體的 表位標簽和其對應的抗體時，能夠使用蛋白質印跡分析(Westernblotanalysis)，免疫沉 淀(immunoprecipitation)，免疫熒光(immunofluorescence)，免疫細胞化學 (immunocytochemistry)，免疫親和純化(immunoaffinitypurification)等方法對目的蛋 白質進行檢測或純化，因此可以消除對目的蛋白質產生抗體的必要性。

目前使用于蛋白質標記(proteintagging)或者表位標記(epitopetagging)的 表位標簽有從六個氨基酸殘基程度的短肽標簽(例如，6×組氨酸(Histidine，His)標簽)至 40kDa程度大的蛋白質(例如，MBP)的很多獨特的標記[參見Stevens,R.C.,(2000) StructureFoldDes8:R177-85]，而一般會使用由3至30個氨基酸構成的肽標簽。His-標 記的蛋白質在Ni-NTA(鎳-次氮基三乙酸)的樹脂上被特異性地捕獲，且其可以通過EDTA或 咪唑被洗脫下來。除此之外，麥芽糖結合蛋白質(MBP)(396個氨基酸，40kDa)、金黃色葡萄球 菌蛋白質A、鈣調蛋白質結合肽(CBP)(26個氨基酸，2.96kDa)、綠色熒光蛋白質(Green FluorescentProtein，GFP)(238個氨基酸，27kDa)及谷胱甘肽-S-轉移酶(GST)(211個氨基 酸，26kDa)也可用于原核生物及真核生物蛋白質的檢測或純化。并且，通常最常用的表位標 簽有c-myc標簽，HA標簽，FLAG標簽等。c-myc標簽是源于人的c-myc蛋白質的長度為10個氨 基酸的表位標簽[Evansetal.,(1985)Mol.Cell.Biol.,12:3610-3616]，HA標簽是源自流 感病毒血凝素(influenzahemagglutinin)HA-1蛋白質的長度為9個氨基酸的表位標簽 [Fieldetal.,(1988)Mol.Cell.Biol.,8:2159-2165]，FLAG標簽是源自噬菌體T7的長度 為8個氨基酸的表位標簽[Hoppetal.,(1988)Bio/Technology,6:1204-1210]。