[發(fā)明專利]用于FLOURY(FL2)性狀基因滲入的玉米中的FLOURY 2基因特異性測定法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201380038311.0 | 申請日： | 2013-05-29 |
| 公開（公告）號： | CN104837985B | 公開（公告）日： | 2019-10-25 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | W.陳;N.瓦諾普多普;S.J.普倫;P.弗里德曼;N.查迪爾;S.P.孔帕特拉 | 申請（專利權(quán)）人： | 陶氏益農(nóng)公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12Q1/6827;C12N5/10;A01H1/02;A01H6/46 |
| 代理公司： | 北京市柳沈律師事務(wù)所 11105 | 代理人： | 張文輝 |
| 地址： | 美國印*** | 國省代碼： | 美國;US |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 用于 floury fl2 性狀 基因 滲入 玉米 中的 特異性 測定法 | ||
本公開內(nèi)容關(guān)注用于測定含有一個或多個floury2(fl2)突變的玉米植物的接合性的組合物和方法。在實施方案中，本公開內(nèi)容關(guān)注用于鑒定植物中的floury2性狀的基于PCR的基因特異性分子測定法。在某些實施方案中，公開了用于就fl2等位基因而言測定玉米植物的接合性的組合物和方法。在具體的實施方案中，測定法可以用于fl2種質(zhì)鑒定，這加速玉米和其它植物中的基因滲入和分子育種程序。
對相關(guān)申請的交叉引用
本申請主張35U.S.C.§119(e)下的2012年5月30日提交的美國臨時申請系列號第61/653,287號的優(yōu)先權(quán)，其公開內(nèi)容通過全文引用并入本文。
通過提及并入電子提交的材料
因此與本文同時提交并且標(biāo)示如下：1個28,672字節(jié)ASCII(文本)文件、名稱為“225450_SEQ_LISTING_ST25.txt”、創(chuàng)建于2013年5月28日的計算機(jī)可讀的序列表，通過全文引用并入本文。
發(fā)明領(lǐng)域
本發(fā)明公開一般涉及植物育種。提供了用于測定fl2突變的存在和植物在此突變上的接合性的方法。本發(fā)明公開的方法可用于選擇攜帶floury2(fl2)性狀的植物及fl2性狀對植物諸如玉米的基因滲入。
發(fā)明背景
玉米青貯飼料由于其高能量和可消化性而成為反芻動物的一種常用草料。經(jīng)常將玉米谷物添加到定量給糧(ration)配方以改善營養(yǎng)平衡。谷粒硬度和質(zhì)地在淀粉可消化性中發(fā)揮重要的作用。較軟的谷?；蛟谄洳惶墒鞎r收獲的雜種更容易在瘤胃中消化。天然存在的玉米突變，諸如褐色中脈(brown midrib)(BMR)、floury2(fl2)、和opaque2(O2)由于它們與較軟的谷粒中脈相關(guān)已成為青貯飼料產(chǎn)品開發(fā)的焦點。例如，BMR種質(zhì)降低了細(xì)胞壁木質(zhì)素含量。Cherney等(1991)Adv.Agron.46:157-98。具有fl2或O2突變的植物生成軟的，具有不規(guī)則形狀的蛋白質(zhì)體和比野生型更高的賴氨酸含量的淀粉質(zhì)乳胚。Coleman等(1997)PNAS 94:7094-97。將具有fl2或O2突變的谷物添加到定量給糧可以提高反芻動物的消化性，降低了營養(yǎng)要求所需的谷物量并降低收獲時谷粒加工的需要。參見Ladely等(1995)J.Anim.Sci.73:228-235。
據(jù)報告，floury2性狀與玉米醇溶蛋白基因家族(玉米種子中主要的醇溶谷蛋白貯存蛋白)的成員之一中的突變有關(guān)。Song等(2001)Gen.Res.11:1817-25。fl2突變對玉米系中的基因滲入是一個費時的過程。由于fl2突變體等位基因是半顯性的，基于谷粒透明狀態(tài)(vitreousness)的表型分型是困難的且經(jīng)常是不明確的。Coleman等(1997)。需要一種快速的，基因特異性的分子測定法來檢測fl2突變體等位基因，并測定候選植物中的接合性。此測定法會通過縮短選擇具有期望特征的植物需要的時間而大大促進(jìn)育種工作。
發(fā)明概述
本文中描述了用于floury2玉米品種(例如fl2突變體)的基于PCR的高通量分子表征的方法，其可以大大增強含有fl2的玉米系的基因滲入的育種方法。本發(fā)明公開了通過測定fl2突變體和野生型alpha-玉米醇溶蛋白等位基因的存在或缺乏而用于測定植物組織樣品及由此制備該樣品的植物的接合性的方法。因此，提供了基于PCR的熒光探針接合性測定法(在本文中稱為測定法)，其特異性檢測并測試fl2基因座處的接合性狀態(tài)，并且能夠分辨分離群體間基因中的獨特SNP變體。還公開了包含此獨特SNP的核苷酸序列，和使用這些方法選擇的植物和種質(zhì)。
在一個特定的實施方案中，使用玉米植物組織測定等位基因的接合性和/或存在/缺乏的方法包括：從所述玉米植物組織獲得分離的基因組DNA的樣品；使所述分離的基因組DNA與至少一種包含能夠在高嚴(yán)格性條件下與SEQ ID NO:9雜交的核苷酸序列的核酸分子和至少一種能夠在高嚴(yán)格性條件下與SEQ ID NO:10雜交的核酸分子接觸；并測定所述分離的基因組DNA中fl2突變的接合性。
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