[發(fā)明專利]用于FLOURY(FL2)性狀基因滲入的玉米中的FLOURY 2基因特異性測(cè)定法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201380038311.0 | 申請(qǐng)日： | 2013-05-29 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN104837985B | 公開(kāi)（公告）日： | 2019-10-25 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | W.陳;N.瓦諾普多普;S.J.普倫;P.弗里德曼;N.查迪爾;S.P.孔帕特拉 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 陶氏益農(nóng)公司 |
| 主分類號(hào)： | C12Q1/6895 | 分類號(hào)： | C12Q1/6895;C12Q1/6827;C12N5/10;A01H1/02;A01H6/46 |
| 代理公司： | 北京市柳沈律師事務(wù)所 11105 | 代理人： | 張文輝 |
| 地址： | 美國(guó)印*** | 國(guó)省代碼： | 美國(guó);US |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 用于 floury fl2 性狀 基因 滲入 玉米 中的 特異性 測(cè)定法 | ||
1.一種使用玉米植物組織測(cè)定等位基因的接合性和/或存在/缺乏的方法，該方法包括：
從所述玉米植物組織獲得分離的基因組DNA的樣品；
使所述分離的基因組DNA與多個(gè)核酸分子接觸，所述多個(gè)核酸分子包含能夠在高嚴(yán)格性條件下與SEQ ID NO:9雜交的SEQ ID NO:7，能夠在高嚴(yán)格條件下與SEQ ID NO:10雜交的核苷酸序列SEQ ID NO:6，以及包含SEQ ID NO:8的共同反向引物序列，其能夠在高嚴(yán)格條件下與SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10兩者雜交；并
使用所述多個(gè)核酸分子，通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)等位基因特異性PCR測(cè)定法測(cè)定所述分離的基因組DNA中fl2突變的接合性。
2.權(quán)利要求1的方法，其進(jìn)一步包括：
使所述分離的基因組DNA與兩個(gè)各包含能夠在高嚴(yán)格性條件下與SEQ ID NO:9雜交的核苷酸序列的核酸分子，和兩個(gè)能夠在高嚴(yán)格性條件下與SEQ ID NO:10雜交的核酸分子接觸；
擴(kuò)增所述分離的基因組DNA的與兩個(gè)核酸分子雜交的核苷酸序列之間的所述分離的基因組DNA的核苷酸序列，所述兩個(gè)核酸分子各包含能夠在高嚴(yán)格性條件下與SEQ ID NO:9雜交的核苷酸序列；
擴(kuò)增所述分離的基因組DNA的與兩個(gè)核酸分子雜交的核苷酸序列之間的所述分離的基因組DNA的核苷酸序列，所述兩個(gè)核酸分子各包含能夠在高嚴(yán)格性條件下與SEQ ID NO:10雜交的核苷酸序列；
在擴(kuò)增反應(yīng)中包含至少一個(gè)包含能夠在高嚴(yán)格性條件下與SEQ ID NO:9雜交的核苷酸序列且用第一報(bào)告物標(biāo)記的核酸分子，和至少一個(gè)能夠在高嚴(yán)格性條件下與SEQ ID NO:10雜交且用第二報(bào)告物標(biāo)記的核酸分子；并
檢測(cè)所述第一和第二報(bào)告物的水平。
3.權(quán)利要求2的方法，其中所述第一報(bào)告物和所述第二報(bào)告物是具有可區(qū)別的激發(fā)/發(fā)射光譜的熒光染料。
4.權(quán)利要求3的方法，其中所述第一報(bào)告物是FAM，且所述第二報(bào)告物是VIC。
5.權(quán)利要求1的方法，其中至少一種能夠在高嚴(yán)格性條件下與SEQ ID NO:9雜交的所述核酸分子用第一熒光染料標(biāo)記，且至少一種能夠在高嚴(yán)格性條件下與SEQ ID NO:10雜交的所述核酸分子用具有可區(qū)別的激發(fā)/發(fā)射光譜的第二熒光染料標(biāo)記。
6.權(quán)利要求5的方法，其中所述第一熒光染料是FAM，且所述第二熒光染料是VIC。
7.權(quán)利要求1的方法，其中所述fl2突變包含核苷酸位置495處的SNP(C/T)。
8.一種用于將高賴氨酸含量的性狀可靠且可預(yù)測(cè)地基因滲入植物種質(zhì)中的方法，所述方法包括：
將具有fl2突變的植物與另一個(gè)植物雜交，其中所述fl2突變包含核苷酸位置495處的SNP(C/T)并且其中位置495處的核苷酸是T；
從通過(guò)所述雜交生成的后代植物獲得分離的基因組DNA的樣品；
使所述分離的基因組DNA與多個(gè)核酸分子接觸，所述多個(gè)核酸分子包含能夠在高嚴(yán)格性條件下與SEQ ID NO:9雜交的SEQ ID NO:7，能夠在高嚴(yán)格條件下與SEQ ID NO:10雜交的核苷酸序列SEQ ID NO:6，以及包含SEQ ID NO:8的共同反向引物序列，其能夠在高嚴(yán)格條件下與SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10兩者雜交；
使用所述多個(gè)核酸分子，通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)等位基因特異性PCR測(cè)定法檢測(cè)所述fl2突變；并
從所述雜交選擇對(duì)于所述fl2突變純合的后代，由此生成遺傳工程化植物，其中高賴氨酸含量的性狀已經(jīng)基因滲入所述遺傳工程化植物的種質(zhì)中。
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