[發明專利]縮短的CD95-Fc變體

有效

• 申請號: 201380038208.6
• 申請日: 2013-07-18
• 公開（公告）號: CN104662039B
• 公開（公告）日: 2019-10-08
• 發明（設計）人: O·黑爾;C·杰弗斯;M·斯爾曼
• 申請（專利權）人: 阿珀吉尼科斯股份公司
• 主分類號: C07K14/705
• 分類號: C07K14/705;C12N15/62
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 傅宇昌

本發明涉及分離的融合蛋白，其包含細胞外CD95結構域或其功能片段和Fc結構域或其功能片段；以穩定形式提供這樣的融合蛋白的制劑；以及用于產生這樣的融合蛋白的方法。

描述

本發明涉及分離的融合蛋白，其包含細胞外CD95結構域或其功能片段和Fc結構域或其功能片段；以穩定形式提供這樣的融合蛋白的制劑；以及用于產生這樣的融合蛋白的方法。

在PCT/EP04/03239中描述了包含與免疫球蛋白Fc結構域相融合的死亡受體CD95(Apo-1；Fas)的細胞外結構域的融合蛋白。但是，具有足夠穩定性地以足夠的量提供這樣的融合蛋白經證明是困難的。

通過本發明，首次可能提供這樣的組合物或方法。

根據第一個方面，本發明涉及包含融合蛋白同種型的混合物的組合物，每個融合蛋白包含至少一個細胞外CD95結構域(APO-1；Fas)或其功能片段和至少一個為在大約4.0至大約8.5的pI范圍之內分布的Fc結構域或其功能片段的第二結構域。因此，本文中所使用的細胞外CD95結構域也可以稱為“第一結構域”，而所述Fc結構域可以稱為“第二結構域”。

第一結構域蛋白為細胞外CD95結構域，優選地哺乳動物的細胞外結構域，特別是人的蛋白，即人的細胞外CD95結構域。所述融合蛋白的第一結構域，即細胞外CD95結構域，優選地包含直至人CD95的氨基酸170、171、172或173的氨基酸序列(SED ID NO.1)。信號肽(例如，SED ID NO:1的位置1-25)可以存在或不存在。

特別地對于治療目的，人的蛋白的使用是優選的。

所述融合蛋白可以包含一個或多個第一結構域，其可以是相同或不同的。但是，一個第一結構域，即包含一個細胞外CD95結構域的融合蛋白，是優選的。

根據一個優選的實施方案，所述Fc結構域或其功能片段，即根據本發明的融合蛋白的第二結構域，包含CH2和/或CH3結構域，和可選地至少一部分的鉸鏈區結構域或從其衍生的經修飾的免疫球蛋白結構域。所述免疫球蛋白結構域可以為IgG、IgM、IgD或IgE免疫球蛋白結構域，或者從其衍生的經修飾的免疫球蛋白結構域。優選地，第二結構域包含至少一部分的恒定IgG免疫球蛋白結構域。所述IgG免疫球蛋白結構域可以選自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4結構域，或者選自來自其的經修飾的結構域。優選地，第二結構域為人的Fc結構域，例如IgG Fc結構域，例如人的IgG1 Fc結構域。

所述融合蛋白可以包含一個或多個第二結構域，其可以是相同或不同的。但是，一個第二結構域，即包含一個Fc結構域的融合蛋白，是優選的。

進一步地，第一和第二結構域兩者優選地來自相同的物種。

第一結構域，即所述細胞外CD95結構域或其功能片段，可以位于N-末端或C-末端。第二結構域，即所述Fc結構域或其功能片段，也可以位于所述融合蛋白的C-末端或N-末端。但是，在所述融合蛋白的N-末端處的細胞外CD95結構域是優選的。

根據一個進一步的優選的實施方案，所述融合蛋白為APG101(CD95-Fc，SEQ IDNO:1中的位置26-400)。如由SEQ ID NO:1所定義的，APG101可以為這樣的融合蛋白，其包含人的細胞外CD95結構域(氨基酸26-172)和人的IgG1 Fc結構域(氨基酸172-400)，進一步可選地包含N-末端信號肽(例如，SEQ ID NO:1的氨基酸1-25)。信號肽的存在指明了APG101的未成熟形式。在成熟過程中，信號肽被切除。根據一個特別優選的實施方案，信號序列被切除。具有信號序列的APG101也被術語“未修飾的APG101”所包括。在一個進一步的實施方案中，所述融合蛋白為與APG101具有至少70％同一性，更優選地75％同一性、80％同一性、85％同一性、90％同一性、95％同一性、96％同一性、97％同一性、98％同一性、99％同一性的多肽。根據本申請，術語“同一性”涉及所比較的兩個氨基酸序列是不變的(換言之，在相同的位置處共享相同的氨基酸)的程度。