[發(fā)明專利]用于產(chǎn)生重組艾杜糖-2-硫酸酯酶的細胞

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201380037937.X
• 申請日: 2013-06-28
• 公開（公告）號: CN104540517A
• 公開（公告）日: 2015-04-22
• 發(fā)明（設計）人: F·博爾戈;M·哈特萊因
• 申請（專利權）人: 夏爾人類遺傳性治療公司
• 主分類號: A61K38/46
• 分類號: A61K38/46;C07K1/00;C12P21/06
• 代理公司: 北京商專永信知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 11400
• 代理人: 鄔玥;葛強

相關申請的交叉引用

本申請要求2012年6月29日提交的美國臨時專利申請系列號61/666,719的優(yōu)先權；其完整內容在此通過引用并入。

序列表

在本說明書提及在2013年6月27日以電子形式提交的命名為“2006685-00340_SEQ_LIST”的ASCII.txt文件的序列表。所述.txt文件于2013年6月25日產(chǎn)生，并且大小為25KB。將序列表的全部內容通過引用并入本文。

背景

粘多糖貯積癥II型(MPS?II，亨特綜合癥)是因酶艾杜糖-2-硫酸酯酶(I2S)的缺乏而引起的X染色體連鎖隱性溶酶體貯積癥。I2S從葡糖氨基聚糖(GAG)硫酸皮膚素和硫酸乙酰肝素切割末端2-O-硫酸酯部分。由于亨特綜合癥患者中喪失I2S酶或存在有缺陷的I2S酶，因此GAG在多種細胞類型的溶酶體中逐漸累積，從而導致細胞腫脹，器官腫大，組織破壞和器官系統(tǒng)功能障礙。

一般而言，具有亨特綜合癥的人的身體表現(xiàn)包括軀體和神經(jīng)癥狀。例如，在亨特綜合癥的一些病例中，中樞神經(jīng)系統(tǒng)受累導致發(fā)育遲緩和神經(jīng)系統(tǒng)的問題。而亨特綜合癥的非神經(jīng)癥狀在出生時一般不存在，隨著時間的推移，GAG在體內細胞中的漸進累積可能對身體的外周組織具有巨大影響。GAG在外周組織中的累積導致患者面部特征的鮮明粗糙度，并且造成前額突出、扁平橋和巨舌，此為亨特綜合征患者的最典型特征。類似地，GAG的累積可不利地影響身體的器官系統(tǒng)。最初表現(xiàn)為心臟、肺和呼吸道的壁的增厚，以及肝、脾和腎的異常腫大，這些深刻的變化最終可導致廣泛的災難性器官衰竭。因此，亨特綜合癥總是嚴重的、進行性的和限制壽命的。

酶替代療法(ERT)是用于治療亨特綜合癥(MPS?II)的批準的療法，其包括向亨特綜合癥患者施用外源替代I2S酶。

發(fā)明概述

本發(fā)明除其他事項外提供了用于產(chǎn)生重組I2S蛋白的改進的方法和組合物，所述重組I2S蛋白允許對于亨特綜合癥的更有效的酶替代療法。本發(fā)明涵蓋這樣的發(fā)現(xiàn)：可由經(jīng)工程化以共表達重組I2S蛋白和甲酰甘氨酸生成酶(FGE)的哺乳動物細胞產(chǎn)生更具效能的重組I2S蛋白。出乎意料的是，由這種工程化細胞產(chǎn)生的重組I2S蛋白具有異常高水平的Cα-甲酰甘氨酸(FGly)轉化百分比(例如，大于70％和高達100％)，從而導致重組I2S蛋白的顯著增強的酶活性。此外，已使根據(jù)本發(fā)明的共表達I2S和FGE蛋白的哺乳動物成功地適應在大規(guī)模懸浮培養(yǎng)中生長。因此，本發(fā)明使得能夠更高效地大規(guī)模生產(chǎn)高效能重組I2S蛋白。

因此，在一個方面，本發(fā)明提供了包含第一核酸和第二核酸的細胞，所述第一核酸編碼具有與SEQ?ID?NO:1具有至少約50％(例如，至少約55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％)的同一性的氨基酸序列的艾杜糖-2-硫酸酯酶(I2S)蛋白，所述第二核酸編碼包含與SEQ?ID?NO:5具有至少約50％(例如，至少約55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％)的同一性的氨基酸序列的甲酰甘氨酸生成酶(FGE)蛋白，其中第一和/或第二核酸是外源的，并且其中一旦在細胞培養(yǎng)條件(例如，懸浮或貼壁培養(yǎng))下培養(yǎng)后，細胞產(chǎn)生包含至少約70％(例如，至少約75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)的對應于SEQ?ID?NO:1的Cys59的半胱氨酸殘基至Cα-甲酰甘氨酸(FGly)的轉化的I2S蛋白。