[發明專利]用于產生重組艾杜糖-2-硫酸酯酶的細胞

在審

• 申請號: 201380037937.X
• 申請日: 2013-06-28
• 公開（公告）號: CN104540517A
• 公開（公告）日: 2015-04-22
• 發明（設計）人: F·博爾戈;M·哈特萊因
• 申請（專利權）人: 夏爾人類遺傳性治療公司
• 主分類號: A61K38/46
• 分類號: A61K38/46;C07K1/00;C12P21/06
• 代理公司: 北京商專永信知識產權代理事務所(普通合伙) 11400
• 代理人: 鄔玥;葛強

1.一種細胞，其包含

第一核酸，其編碼包含與SEQ?ID?NO:1具有至少70％的同一性的氨基酸序列的艾杜糖-2-硫酸酯酶(I2S)蛋白；和

第二核酸，其編碼包含與SEQ?ID?NO:5具有至少70％的同一性的氨基酸序列的甲酰甘氨酸生成酶(FGE)蛋白，

其中所述第一和/或所述第二核酸是外源性的，并且其中一旦在細胞培養條件下培養后，所述細胞產生包含至少約70％的對應于SEQ?ID?NO:1的Cys59的半胱氨酸殘基至Cα-甲酰甘氨酸(FGly)的轉化的I2S蛋白。

2.一種細胞，其包含

第一核酸，其編碼包含與SEQ?ID?NO:1具有至少70％的同一性的氨基酸序列的艾杜糖-2-硫酸酯酶(I2S)蛋白；和

第二核酸，其編碼包含與SEQ?ID?NO:5具有至少70％的同一性的氨基酸序列的甲酰甘氨酸生成酶(FGE)蛋白，

其中所述第一和/或所述第二核酸是外源性的，并且其中一旦在細胞培養條件下培養后，所述細胞產生包含至少約60％的對應于SEQ?ID?NO:1的Cys59的半胱氨酸殘基至Cα-甲酰甘氨酸(FGly)的轉化的I2S蛋白并且比生產率為大于約30皮克/細胞/日。

3.根據權利要求1或2所述的細胞，其中一旦在細胞培養條件下培養后，所述細胞產生包含至少約80％的對應于SEQ?ID?NO:1的Cys59的半胱氨酸殘基至Cα-甲酰甘氨酸(FGly)的轉化的I2S蛋白。

4.根據前述權利要求中任一項所述的細胞，其中一旦在細胞培養條件下培養后，所述細胞產生包含至少約90％的對應于SEQ?ID?NO:1的Cys59的半胱氨酸殘基至Cα-甲酰甘氨酸(FGly)的轉化的I2S蛋白。

5.根據前述權利要求中任一項所述的細胞，其中一旦在細胞培養條件下培養后，所述細胞產生包含至少約95％的對應于SEQ?ID?NO:1的Cys59的半胱氨酸殘基至Cα-甲酰甘氨酸(FGly)的轉化的I2S蛋白。

6.根據前述權利要求中任一項所述的細胞，其中一旦在細胞培養條件下培養后，所述細胞產生包含至少約97％的對應于SEQ?ID?NO:1的Cys59的半胱氨酸殘基至Cα-甲酰甘氨酸(FGly)的轉化的I2S蛋白。

7.根據前述權利要求中任一項所述的細胞，其中所述第一和/或所述第二核酸可操作地連接至hCMV啟動子。

8.根據前述權利要求中任一項所述的細胞，其中所述第一核酸編碼具有與SEQ?ID?NO:1相同的氨基酸序列的I2S蛋白。

9.根據前述權利要求中任一項所述的細胞，其中所述第二核酸編碼具有與SEQ?ID?NO:5相同的氨基酸序列的FGE蛋白。

10.根據前述權利要求中任一項所述的細胞，其中所述第一核酸包含與SEQ?ID?NO:7具有至少70％的同一性的序列。

11.根據前述權利要求中任一項所述的細胞，其中所述第一核酸包含SEQ?ID?NO:7的序列。

12.根據前述權利要求中任一項所述的細胞，其中所述第二核酸包含與SEQ?ID?NO:8具有至少70％的同一性的序列。

13.根據前述權利要求中任一項所述的細胞，其中所述第二核酸包含與SEQ?ID?NO:8相同的序列。

14.根據前述權利要求中任一項所述的細胞，其中所述第一和第二核酸均為外源性的。

15.根據前述權利要求中任一項所述的細胞，其中所述第一和/或第二核酸被整合在所述細胞的基因組中。

16.根據前述權利要求中任一項所述的細胞，其中所述第一和/或第二核酸存在于一個或多個染色體外構建體中。

17.根據前述權利要求中任一項所述的細胞，其中所述細胞是哺乳動物細胞。

18.根據權利要求17所述的細胞，其中所述哺乳動物細胞是人細胞。

19.根據權利要求17所述的細胞，其中所述哺乳動物細胞是CHO細胞。

20.根據前述權利要求中任一項所述的細胞，其中所述細胞適應于懸浮培養。