[發明專利]抗腫瘤劑、腫瘤檢測標志物及口服疫苗劑

在審

• 申請號: 201380036660.9
• 申請日: 2013-07-12
• 公開（公告）號: CN104428408A
• 公開（公告）日: 2015-03-18
• 發明（設計）人: 平裕一郎;石田功
• 申請（專利權）人: 學校法人帝京平成大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;A61K35/745;A61K39/02;A61K48/00;A61P35/00;C12N15/09;C12Q1/04;C07K16/00;C07K19/00
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262
• 代理人: 王思琪;鄭霞

技術領域

本發明涉及一種以重組專性厭氧革蘭氏陽性菌為有效成分的抗腫瘤劑、腫瘤檢測標志物及口服疫苗劑。

背景技術

以雙歧桿菌為主的專性厭氧菌給藥于靜脈內的情況下，具有非常高的選擇性，僅在腫瘤中增殖(非專利文獻1)。其被認為是由于腫瘤的中心部為低氧區域，因此存在厭氧環境，專性厭氧菌可以生存及增殖。另外，也具有雙歧桿菌為革蘭氏陽性菌、死后也沒有放出內毒素的危險性的優點。另一方面，腫瘤組織的中心部的該厭氧環境也被認為是在現有的化學療法中產生抵抗性的原因(非專利文獻2)。因此，利用雙歧桿菌的上述特征，作為對于腫瘤組織的DDS(藥物遞送系統)載體的有用性正在備受關注。

例如，在專利文獻1及非專利文獻3中，以實體癌治療為目的，公開有如下發明：制作出能夠將作為前藥的5-氟胞嘧啶(5-FC)轉化為5-氟尿嘧啶(5-FU)的表達大腸桿菌的胞嘧啶脫氨酶(CD：cytosine?deaminase)的重組雙歧桿菌，通過將該重組雙歧桿菌與5-FC同時給藥而得到抗腫瘤效果。但是，該方法存在如下問題：除重組雙歧桿菌之外，需要將5-FC大量地給藥于生物體，因此繁瑣，考慮副作用等時，在臨床開發時產生各種制約。

另外，在專利文獻2中公開有如下發明：制作出可以使具有生物活性的多肽以高水平分泌表達的重組雙歧桿菌，將重組雙歧桿菌直接注入于腫瘤中。但是，該方法存在如下問題：由于需要準確地鎖定腫瘤的位置，因此適用范圍窄，另外，在體內深部存在腫瘤的情況下，侵襲性高，因此缺乏通用性。

作為使用其它細菌的腫瘤治療方法，報道有專利文獻3及非專利文獻4及5中記載的諾維梭狀芽孢桿菌(Clostridium?novyi)或非專利文獻6及7中記載的鼠傷寒沙門氏桿菌(Salmonella?typhimurium)等，但均為來自病原性細菌，分泌有害的外毒素，因此在給藥的生物體的安全方面存在大問題。

現有技術文獻

專利文獻

專利文獻1：日本專利第3642755

專利文獻2：WO/2010/126073

專利文獻3：日本特開2009-541319

非專利文獻

非專利文獻1：Kimura?N.T.，等人，1980，Cancer?Res.，40(6)：2061-2068.

非專利文獻2：Tredan?O，等人，2007，J?Natl?Cancer?Inst，99：1441-1454.

非專利文獻3：S.Taniguchi等人，2010，Cancer.Sci.，101(9)：1925.

非專利文獻4：Dang?L.H.，等人，2001，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，98：15155-15160.

非專利文獻5：Ian?C.，等人，2006，Science?314：1308-1311.

非專利文獻6：Pawelek?J.M.，等人，1997，Cancer?Res.，57：4537-4544.

非專利文獻7：Toso?J.F.，等人，2002，J.Clin.Oncol.，20：142-152.

發明內容

本發明的課題在于，提供一種重組專性厭氧革蘭氏陽性菌，其作為能夠將處在可表達及分泌編碼功能性肽的狀態下的核酸遞送至靶細胞周邊的藥劑遞送載體發揮作用。

本發明的課題在于，提供一種侵襲性低、副作用小、靶特異性高的抗腫瘤劑和/或可以經時地監視治療效果的腫瘤檢測標志物。

本發明的課題在于，提供一種口服疫苗劑，其為非侵襲性，副作用低，且靶特異性高。

考慮作為藥劑遞送載體的專性厭氧菌的臨床應用時，通用性高的靜脈內給藥的治療法是有效的。但是，為此需要構建以癌細胞為特異性的靶，且細胞傷害活性高的生理活性肽。但是，存在在雙歧桿菌內使免疫球蛋白(IgG)表達的情況下，具有功能性的抗體沒有表達的大問題。

本發明人等為了解決上述課題，制作含有編碼由信號肽、單鏈抗體構成的低分子量的抗腫瘤抗體、及外毒素構成的分泌型融合蛋白質的核酸的基因重組雙歧桿菌，對荷瘤小鼠異種移植動物模型(Xenograft?model)給藥于靜脈內，結果在以下方面取得成功：該重組雙歧桿菌以非常高的選擇性蓄積在腫瘤內，且不給生物體帶來大的副作用，根據所分泌的融合蛋白質的細胞傷害活性抑制該腫瘤細胞的增殖90％以上。本發明是基于該研究結果的發明，具體而言，提供以下的發明。