[發明專利]用于生產b型流感嗜血桿菌抗原的方法

有效

• 申請號: 201380035582.0
• 申請日: 2013-07-02
• 公開（公告）號: CN104583390B
• 公開（公告）日: 2018-07-10
• 發明（設計）人: J.勒希爾;P.盧比埃;F.巴比拉托;N.林德利
• 申請（專利權）人: 賽諾菲巴斯德有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A61K39/102;A61K47/26
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 黃念;彭昶

本發明涉及用于在工業規模上生產用于疫苗目的b型流感嗜血桿菌的莢膜多糖(PRP)的方法，根據所述方法，將b型流感嗜血桿菌(Hib)的菌株在培養基中培養，收獲該培養上清液，處理該培養上清液以便從其提取莢膜多糖，所述培養基包含至少：–一種碳源，–原卟啉，–鹽，–氨基酸，–NAD或NADH，–維生素，–pH調節手段，其特征在于所述培養基是在化學上確定的。

本發明涉及用于在工業規模上生產b型流感嗜血桿菌(Hib)的莢膜多糖的方法，根據所述方法，將Hib的菌株在特定培養基中培養，所述培養基的組成是在化學上進行定義的，且因此不包含任何復雜的氮源或碳源。

現有技術，具體而言申請W2009007641，描述了用于b型流感嗜血桿菌的改進培養基，其不包含任何來自動物源的要素，如當培養b型流感嗜血桿菌的目的在于產生將隨后作為抗原引入疫苗組合物的莢膜多糖時所推薦。在該現有技術中描述的培養基中，用植物蛋白胨代替通常由動物蛋白胨組成的氮源。

此類培養基在藥物產品的安全性方面而言代表了很大進展，特別是關于消除了疾病諸如牛海綿狀腦炎傳播的風險；因此，它們允許符合衛生監督機構的推薦。

然而，蛋白胨的組成可以根據所提供的批次而變化，這可以導致產生的細菌量和還有有用抗原的產量的變化，這是疫苗生產者試圖通過改變在方法的實施過程中的某些參數來限制或校正的。然而，在藥物產品的工業生產的背景下，期望能夠具有可用的穩健方法，其需要在每次實施時盡可能少的改變，并且其在每個步驟的結果在批次間是可再現的。

此類方法還必須允許產率與工業盈利相容，在從細菌產生抗原的情況下，標準不僅僅是僅獲得最大可能量的細菌，而且獲得抗原滴度和產生的細菌量之間的最佳比率；其因此對于在向著產生莢膜多糖引導細菌的代謝的條件下培養的細菌是期望的。

為此，本發明的主題是用于在工業規模上生產意欲用于疫苗目的的b型流感嗜血桿菌（Haemophilus influenzae type b）的莢膜多糖(PRP)的方法，根據所述方法，將b型流感嗜血桿菌(Hib)的菌株在培養基中培養，收獲該培養上清液，處理該培養上清液以便從其提取莢膜多糖，所述培養基包含至少：

– 一種碳源，

– 原卟啉，

– 鹽，

– 氨基酸，

– NAD或NADH，

– 維生素，

– pH調節手段，

其特征在于所述培養基是在化學上確定的。

憑借本發明，通過能夠具有穩健的工業方法，提高莢膜多糖的產率，而不必相應地增加生物量，由此使得可能相對于所生產的PRP量降低產生的脂多糖(LPS)的量。

此外，培養基組成中不存在蛋白降低了所需的消泡劑產品方面的需求，且簡化了純化步驟，這使得可能從培養上清液獲得由莢膜多糖組成的抗原。

根據本發明，所述培養基包含pH調節手段。這些pH調節手段可以由緩沖鹽和/或與用于將酸或堿添加至培養基的裝置組合的pH測量裝置組成。借助于pH的調節，產率可以進行優化。

根據一個實施方案，根據本發明的方法還在于將產生的PRP綴合至載體蛋白，諸如破傷風蛋白。

本發明的一個主題還是用于制備疫苗組合物的方法，根據所述方法：

- 通過于在化學上確定的培養基中培養Hib的菌株在工業規模上制備由莢膜多糖(PRP)組成的針對b型流感嗜血桿菌(Hib)的抗原，所述培養基的每種成分的性質和量是完全確定的，且包含至少：

– 一種碳源，

– 原卟啉，

– 鹽，