[發明專利]用于生產b型流感嗜血桿菌抗原的方法

有效

• 申請號: 201380035582.0
• 申請日: 2013-07-02
• 公開（公告）號: CN104583390B
• 公開（公告）日: 2018-07-10
• 發明（設計）人: J.勒希爾;P.盧比埃;F.巴比拉托;N.林德利
• 申請（專利權）人: 賽諾菲巴斯德有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A61K39/102;A61K47/26
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 黃念;彭昶

1.用于在工業規模上生產用于疫苗目的的b型流感嗜血桿菌的莢膜多糖(PRP)的方法，根據所述方法，將b型流感嗜血桿菌(Hib)的菌株在培養基中培養，收獲該培養上清液，處理該培養上清液以便從其提取莢膜多糖，所述培養基包含至少：

– 一種碳源，

– 原卟啉，

– 鹽，

– 氨基酸，

– NAD或NADH，

– 維生素，

– pH調節手段，和

– 鋅，

其特征在于所述培養基中的每種成分的化學結構和量是完全確定的，且鋅的濃度對應于2.5 - 80 mg/L ZnSO₄.7H₂O。

2.根據權利要求1的方法，其特征在于所述培養基包含尿嘧啶或次黃嘌呤。

3.根據權利要求1的方法，其特征在于所述碳源包含以下至少一種：葡萄糖、果糖、半乳糖、甘油、木糖、核糖、巖藻糖、唾液酸和乳酸鹽。

4.根據權利要求1的方法，其特征在于所述pH調節手段由緩沖鹽組成。

5.根據權利要求1的方法，其特征在于所述原卟啉是合成的原卟啉IX。

6.根據權利要求1的方法，其特征在于所述鹽選自鉀鹽、鎂鹽、鈉鹽、鈣鹽、鐵鹽、鋅鹽、鈷鹽和錳鹽。

7.根據權利要求1或6的方法，其特征在于所述鹽選自：K₂HPO₄；KH₂PO₄；MgSO₄.7H₂O；Na₂HPO₄.12H₂O；NaH₂PO₄.2H₂O；CaCl₂.2H₂O；FeSO₄.7H₂O；ZnSO₄.7H₂O；CoCl₂. 6H₂O；MnSO₄.H₂O。

8.根據權利要求1的方法，其特征在于所述氨基酸選自以下一種或多種：

精氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、賴氨酸、組氨酸、色氨酸、纈氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、胱氨酸或等效物。

9.根據權利要求1的方法，其特征在于所述培養基至少包含精氨酸、丙氨酸、組氨酸、色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、胱氨酸、天冬氨酸和谷氨酸。

10.根據權利要求8或9的方法，其特征在于用谷胱甘肽或半胱氨酸替代胱氨酸。

11.根據權利要求1或2的方法，其特征在于所述維生素選自：硫胺素、泛酸鹽、生物素、核黃素和吡哆醇。

12.根據權利要求2的方法，其特征在于用瓜氨酸替代尿嘧啶。

13.根據權利要求8或9的方法，其特征在于用瓜氨酸替代精氨酸。

14.根據權利要求1或2的方法，其特征在于其還包括將獲得的莢膜多糖綴合至載體蛋白的步驟。

15.根據權利要求14的方法，其特征在于所述載體蛋白是破傷風類毒素。

16.用于制備疫苗組合物的方法，所述方法包含根據權利要求1-13中任一項權利要求的方法制備莢膜多糖的步驟。