[發(fā)明專利]用于抗原遞送的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201380033558.3
• 申請日: 2013-04-18
• 公開（公告）號: CN104684586B
• 公開（公告）日: 2019-02-05
• 發(fā)明（設計）人: A.C.薩希里奧格魯;N.奧佐倫
• 申請（專利權）人: 博阿濟吉大學
• 主分類號: A61K47/64
• 分類號: A61K47/64;C07K14/47;C07K14/50
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 初明明;梁謀

本發(fā)明涉及用于抗原和/或生物活性分子遞送的新方法和在抗原和/或生物活性分子遞送中發(fā)揮功能的包含ASC斑點載體和ASC斑點載體運載的抗原和/或生物活性分子的組合物。

發(fā)明領域

本發(fā)明涉及用于抗原和/或生物活性分子遞送的新方法。

發(fā)明背景

傳統(tǒng)地，疫苗基于身體對抗殺死或減活病原體產(chǎn)生抗體的原理。最近，開始了對基于注射病原體的特別組分而非注射整個病原體本身開發(fā)亞單位疫苗的研究，以改善生物安全性。亞單位疫苗包括病原體編碼的肽或蛋白性質(zhì)的抗原。為了使這些肽和蛋白容易被抗原呈遞細胞(APC)吞入，將抗原裝入納米或微米-大小顆粒。這些疫苗類型被稱為顆粒疫苗(De Temmerman等，2011)。

正在進行對用作顆粒疫苗的多個抗原遞送方法的研究。乳劑、脂質(zhì)體、免疫刺激劑復合物、病毒樣顆粒、金、二氧化硅顆粒和基于聚合物的顆粒被用于此目的。基于聚合物的顆粒可基于生物可降解的化合物，例如聚(D,L-乳酸) (PLA)和聚(D,L-乳酸-乙醇酸共聚物) (PLGA)，或非-生物可降解的化合物，例如聚苯乙烯。疊層膠囊、殼聚糖顆粒、微米-和納米凝膠尤其為基于聚合物的抗原遞送方法。

上述所有遞送方法的共同特點為增加抗原的大小以使其容易被APC吞入(Xiang等，2006)。顆粒疫苗的另一個性質(zhì)為減緩抗原細胞外或吞入后細胞內(nèi)的酶降解，以延長抗原停留在所述環(huán)境中的時期，從而增強APC將這些抗原呈遞給T細胞的能力。

與抗原遞送中使用的那些相似的方法還正用在控制藥物釋放系統(tǒng)中。存在其中經(jīng)由口服或鼻途徑使用微粒藥物釋放系統(tǒng)的應用。存在許多對從基于聚合物的微粒控制釋放生長因子的研究(Balmayor等，2011)。

抗原被APC有效吞入在抗體產(chǎn)生過程中至關總要。為了達到這一目的，將短肽抗原(半抗原)與較大的載體蛋白交聯(lián)。為此最經(jīng)常使用的載體蛋白為匙孔血藍蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)蛋白。最優(yōu)選的載體蛋白KLH為從Megathura crenulata分離的分子量350 kDa的蛋白。該蛋白有聚集傾向。KLH的可溶和聚集體形式二者均顯示抗原性質(zhì)。由于其大尺寸，在細菌中表達KLH蛋白或通過分子克隆方法融合半抗原和KLH編碼序列并不實際。

在上述抗原和/或藥物遞送系統(tǒng)中，脂質(zhì)體和水凝膠降解相對較快。除此之外，脂質(zhì)體還傾向于互相融合。因此，脂質(zhì)體和水凝膠二者均具有短的儲存壽命。

用于合成基于聚合物的微粒的方法(有機溶劑、高溫和凍融循環(huán))可損傷抗原或生物活性分子有效負載的結構和活性。

一般而言，與全-病原體疫苗相比亞單位疫苗產(chǎn)生較低的抗原產(chǎn)量。已經(jīng)發(fā)展了多個策略克服這一問題。第一個方法為用具有與APC膜融合傾向的分子(抗體、受體配體)包覆微粒。這樣，微粒被APC吞入的頻率增加。另一個策略為用靶向特定APC受體的分子(佐劑)包覆微粒，所述受體提高APC抗原呈遞能力。Toll樣受體(TLR)家族成員在結合其配體時受激并且激活促進細胞抗原呈遞能力的途徑。為了刺激TLR家族成員，微粒用CpG、聚(I:C)、MPL、3M-019和鞭毛蛋白配體覆蓋。

包含CARD的細胞凋亡-相關斑點樣蛋白(ASC、PYCARD、TMS1)為在N-末端具有PYD結構域和在C-末端具有CARD結構域的22 kDa接頭蛋白，其作用于NLRP3、NLRC4和AIM2炎性小體復合物。ASC蛋白在炎癥和pyroptotic信號通路中胱天蛋白酶-1蛋白的激活中發(fā)揮作用(Franchi等，2009)。炎性小體復合物被激活時在核周腔形成斑點結構(ASC斑點)的為胞質(zhì)蛋白(Miao等，2011)。

pyroptotic細胞死亡期間，一旦出現(xiàn)促炎刺激ASC蛋白形成直徑數(shù)微米的被稱為pyroptosome的球狀超分子結構。據(jù)推測，pyroptosome通過寡聚體化ASC二聚體形成(Fernandes-Alnemri等，2007)。