[發(fā)明專利]用于在細(xì)胞中表達(dá)基因的啟動子

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201380032068.1
• 申請日: 2013-06-17
• 公開（公告）號: CN104508114A
• 公開（公告）日: 2015-04-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 埃里克·皮特·洛斯;威爾伯特·赫爾曼·馬里·海涅;赫爾曼·揚(yáng)·佩爾;羅波圖斯·安東尼厄斯·戴維爾德;布倫達(dá)·沃恩克
• 申請（專利權(quán)）人: 帝斯曼知識產(chǎn)權(quán)資產(chǎn)管理有限公司
• 主分類號: C12N1/15
• 分類號: C12N1/15;C12N9/18;C12N9/26;C12N9/42;C12N15/80;C12P1/02;C12P21/02
• 代理公司: 北京東方億思知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司11258
• 代理人: 肖善強(qiáng)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及DNA序列，特別是經(jīng)分離的啟動子，以及涉及包含與編碼序列可操作相連(in?operative?association)的這些啟動子的DNA構(gòu)建體、載體和宿主細(xì)胞。本發(fā)明還涉及表達(dá)基因和/或生產(chǎn)生物化合物的方法。

背景技術(shù)

在宿主細(xì)胞中生產(chǎn)重組生物化合物通常是通過構(gòu)建表達(dá)盒來完成的，其中編碼生物化合物的DNA可操作地連接適合于宿主細(xì)胞的啟動子。可通過質(zhì)粒或者載體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化將表達(dá)盒引入宿主細(xì)胞內(nèi)。然后可通過在表達(dá)盒中含有的啟動子正常發(fā)揮功能所必需的誘導(dǎo)條件下培養(yǎng)經(jīng)轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞來完成生物化合物的生產(chǎn)。

對于各宿主細(xì)胞而言，已通過轉(zhuǎn)化引入宿主內(nèi)的編碼序列的表達(dá)和通過該編碼序列編碼的重組生物化合物的生產(chǎn)需要獲得功能性啟動子。已知大量啟動子在多種宿主細(xì)胞中具備功能性。以下為真菌宿主細(xì)胞中跨物種使用的啟動子的例子：Aspergillus?nidulans的啟動子(已知A.nidulans?gpdA基因在Aspergillus?niger(A.niger)中有功能(J?Biotechnol.1991Jan；17(1):19-33.Intracellular?and?extracellular?production?of?proteins?in?Aspergillus?under?the?control?of?expression?signals?of?the?highly?expressed?A.nidulans?gpdA?gene.Punt?PJ,Zegers?ND,Busscher?M,Pouwels?PH,van?den?Hondel?CA)。另一個例子是用于A.niger和A.nidulans的A.nigerβ-木糖苷酶xlnD啟動子(Transcriptional?regulation?of?the?xylanolytic?enzyme?system?of?Aspergillus，van?Peij,NNME,PhD-thesis?Landbouwuniversiteit?Wageningen,the?Netherlands,ISBN?90-5808-154-0)以及Escherichia?coliβ-葡糖醛酸酶基因在A.niger、A.nidulans和Cladosporium?fulvum中的表達(dá)，如Curr?Genet.1989Mar；15(3):177-80:Roberts?IN,Oliver?RP,Punt?PJ,van?den??Hondel?CA.“Expression?of?the?Escherichia?coli?beta-glucuronidase?gene?in?industrial?and?phytopathogenic?filamentous?fungi”中所述。

迄今為止，沒有Rasamsonia?emersonii啟動子用于形成重組產(chǎn)品，而僅僅使用跨物種使用的啟動子。

仍然需要以下的啟動子：其用于控制經(jīng)引入基因的表達(dá)，用于控制內(nèi)源基因的表達(dá)水平，用于控制內(nèi)源基因的表達(dá)調(diào)節(jié)或者用于介導(dǎo)內(nèi)源基因的失活，或者用于生產(chǎn)多肽，或者用于前述應(yīng)用的組合。這些啟動子，優(yōu)選為經(jīng)改進(jìn)的啟動子，可以例如比之前已知的啟動子更強(qiáng)。它們也可被特定便利的底物或者化合物誘導(dǎo)。當(dāng)期望在單種宿主中同時過表達(dá)多種基因時，知道若干種功能性啟動子也是有利的。為了防止壓制(squelching)(特定轉(zhuǎn)錄因子的滴定(titration))，優(yōu)選使用多種不同的啟動子，例如每個待表達(dá)的基因使用一個特定的啟動子。

發(fā)明簡述

根據(jù)第一方面，本發(fā)明提供Rasamsonia啟動子DNA序列，優(yōu)選Rasamsonia?emersonii啟動子DNA序列，更優(yōu)選地，其連接可被過表達(dá)的編碼序列。本發(fā)明的Rasamsonia啟動子DNA優(yōu)選連接可被過表達(dá)的編碼序列。有利地，本發(fā)明的Rasamsonia啟動子對應(yīng)于強(qiáng)啟動子和/或誘導(dǎo)型啟動子。

根據(jù)另一方面，本發(fā)明提供啟動子DNA序列，例如：?

(a)以下列表中所示的DNA序列：SEQ?ID?NO:1、SEQ?ID?NO:2、SEQ?ID?NO:3、SEQ?ID?NO:4、SEQ?ID?NO:5、SEQ?ID?NO:12、SEQ?ID?NO:13、SEQ?ID?NO:14、SEQ?ID?NO:15、SEQ?ID?NO:16或者SEQ?ID?NO:17；