[發明專利]通過RNA原位雜交檢測免疫球蛋白輕鏈限制性

在審

• 申請號: 201380029752.4
• 申請日: 2013-04-05
• 公開（公告）號: CN104619859A
• 公開（公告）日: 2015-05-13
• 發明（設計）人: 馬小駿;羅宇齡;雷蒙德·塔布斯
• 申請（專利權）人: 領先細胞醫療診斷有限公司;克里夫蘭診所基金會
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262
• 代理人: 王思琪;鄭霞

本申請主張2013年3月15日提交的美國申請序列號No.13/843408的優先權，和2012年4月5日提交的美國臨時申請序列號No.61/620634的優先權，和2012年10月22日提交的美國臨時申請序列號No.61/717064的優先權，它們中的每一篇的全部內容作為參考并入本文。

本發明是在國家癌癥學會(National?Cancer?Institute)授予的基金號R43CA168019的政府支持下進行的。政府對本發明具有一定的權利。

背景技術

本發明總體上涉及原位雜交測定，并且更具體地涉及用于診斷B細胞腫瘤的測定。

免疫球蛋白由兩條重鏈和兩條輕鏈組成。在B細胞分化期間，編碼免疫球蛋白基因的DNA經歷重排以產生個體免疫系統可用的具有較大多樣性的可能免疫球蛋白的免疫球蛋白域的獨特組合。每種成熟B細胞表達不同的免疫球蛋白域的組合。存在兩類輕鏈，分別表示為κ和λ。在B細胞成熟期間，所發生的DNA重排導致每種成熟B細胞表達具有κ輕鏈或λ輕鏈中任一種的免疫球蛋白。因此，在給定分化的B細胞中，B細胞將表達κ輕鏈或λ鏈中的一種。在正常哺乳動物生物體中，所述生物體將具有單獨表達κ或λ輕鏈中一種的B細胞群體，但是作為群體，其將具有κ和λ輕鏈表達細胞的混合。這種細胞群體被認為是多克隆的。

贅生性細胞的特征在于無限制的細胞生長。就B細胞腫瘤來說，腫瘤B細胞的無限制細胞生長導致產生了包括相同細胞多個拷貝的群體B細胞。由于成熟B細胞通常表達κ或λ輕鏈中的一種，因此腫瘤B細胞群體將顯示出相同細胞的多種拷貝的特征，以及因此僅表達κ鏈或僅表達λ輕鏈的細胞的多種拷貝的特征。這種含有相同細胞的多個拷貝的群體被認為是克隆的，并且克隆性的特征在于贅生性細胞的異常細胞生長。

因此，克隆性擴增(clonal?expansion)是B細胞惡性腫瘤的標志之一，并且最常表示為免疫球蛋白(Ig)輕鏈(κ或λ中的任一種)的限制性表達(Cook,“Molecular?Hematopathology,”Tubbs&Stoler主編，Cell?and?Tissue?Based?Molecular?Pathology,Churchill?Livingstone?Elsevier(2008))。Ig輕鏈限制性(LCR)的臨床實驗室檢測是分化診斷(包括淋巴增生、非典型淋巴增生、慢性炎癥和B細胞腫瘤)中有幫助的輔助工具(Cook，如上，2008；Taylor,Applied?Immunohistochem.Mol.Morphology?17:470–482(2009a)；Taylor,Applied?Immunohistochem.Mol.Morphology?17:366–374(2009b))。

通過免疫組織化學和常規顯色原位雜交(CISH)的LCR鑒定對于表達大量κ或λmRNA和細胞質免疫球蛋白的B細胞腫瘤來說是可行的(Beck等人，Diagnostic?Mol.Pathol.12:14–20(2003))。在福爾馬林固定的石蠟包埋的(FFPE)組織中，漿細胞骨髓瘤LCR幾乎總是可行的。但是僅非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)的罕見亞型(少數具有大量Ig?mRNA和蛋白質表達)是通過這些傳統方法可評價的(Beck等人，如上，2003)。相反，在所有NHL亞型的絕大部分中，放射自顯影原位雜交足夠靈敏以檢測極低水平的輕鏈mRNA(Segal等人，Diagnostic?Mol.Pathol.:Am.J.Surg.Pathol.,part?B,3:170–177(1994)，所述亞型包括最常見的NHL變體-濾泡性淋巴瘤、彌漫性大B細胞淋巴瘤、小B淋巴細胞性淋巴瘤和MALT型結外邊緣區淋巴瘤。但是，放射自顯影信號需要兩周或更長時間來顯影(Segal等人，如上，1994)，對于臨床控制來說，這種延遲是不可接受的。

因此，需要用于良性和癌性B細胞樣品鑒定的精確并且快速的測定。本發明滿足了這種需要并且也提供了相關優勢。

發明概述