[發明專利]通過RNA原位雜交檢測免疫球蛋白輕鏈限制性

在審

• 申請號: 201380029752.4
• 申請日: 2013-04-05
• 公開（公告）號: CN104619859A
• 公開（公告）日: 2015-05-13
• 發明（設計）人: 馬小駿;羅宇齡;雷蒙德·塔布斯
• 申請（專利權）人: 領先細胞醫療診斷有限公司;克里夫蘭診所基金會
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262
• 代理人: 王思琪;鄭霞

1.用于檢測B細胞中免疫球蛋白輕鏈限制性和克隆性的方法，所述方法包括：

(a)從受試者獲得B細胞樣品；

(b)利用(i)設計為特異性雜交至免疫球蛋白κ鏈恒定區(IGKCR)RNA的至少一種探針組；和(ii)設計為特異性雜交至免疫球蛋白λ鏈恒定區(IGLCR)RNA的至少一種探針組對所述樣品進行雙重原位雜交測定；

(c)檢測所述樣品中B細胞群體中與雜交的IGKCR探針有關的信號和與雜交的IGLCR探針有關的信號；和

(d)確定所述B細胞群體中單個細胞內與雜交的IGKCR探針和雜交的IGLCR探針有關的信號模式，其中單個細胞中的信號模式表明存在或不存在所述B細胞的輕鏈限制性和克隆性。

2.根據權利要求1所述的方法，其中，僅有與雜交的IGKCR探針有關的信號的個體B細胞中的模式表明樣品中的κ限制性。

3.根據權利要求1所述的方法，其中，僅有與雜交的IGLCR探針有關的信號的個體B細胞中的模式表明樣品中的λ限制性。

4.根據權利要求1所述的方法，其中，相同B細胞中與雜交的IGKCR探針有關的信號和與雜交的IGLCR探針有關的信號兩者的模式表明所述樣品是單克隆的。

5.根據權利要求1所述的方法，其中，所述群體內單獨B細胞中與雜交的IGKCR探針有關的信號和與雜交的IGLCR探針有關的信號兩者的模式表明所述樣品是多克隆的。

6.根據權利要求1-5中任一項所述的方法，其中，所述受試者是人。

7.用于檢測B細胞中免疫球蛋白輕鏈限制性和克隆性的方法，所述方法包括：

(a)從受試者獲得B細胞樣品；

(b)利用(i)設計為特異性雜交至免疫球蛋白κ鏈恒定區(IGKCR)RNA的至少一種探針組；(ii)設計為特異性雜交至免疫球蛋白λ鏈恒定區(IGLCR)RNA的至少一種探針組；和(iii)設計為特異性雜交至免疫球蛋白λ樣多肽5(IGLL5)RNA的至少一種探針組對所述樣品進行一種或多種原位雜交測定；

(c)檢測所述樣品中B細胞群體中與雜交的IGKCR探針有關的信號，與雜交的IGLCR探針有關的信號、和與雜交的IGLL5探針有關的信號；和

(d)確定所述B細胞群體中單個細胞內與雜交的IGKCR探針、雜交的IGLCR探針和雜交的IGLL5探針有關的信號的模式，其中所述單個細胞中的信號模式表明存在或不存在所述B細胞的輕鏈限制性和克隆性。

8.根據權利要求7所述的方法，其中，作為單重反應在連續切片上進行一個或多個原位雜交測定。

9.根據權利要求7所述的方法，其中，所述IGKCR探針組和IGLCR探針組在相同原位雜交測定中雜交。

10.根據權利要求9所述的方法，其中，IGLL5探針組的雜交是處于其中IGKCR探針組和IGLCR探針組被雜交的測定中的單獨原位雜交測定中。

11.根據權利要求7-10中任一項所述的方法，還包括使用至少一種陰性對照探針組。

12.根據權利要求7-11中任一項所述的方法，其中，僅具有與雜交的IGKCR探針有關的信號的個體B細胞中的模式表明所述樣品中的κ限制性。

13.根據權利要求7-11中任一項所述的方法，其中，僅具有與雜交的IGLCR探針有關的信號的個體B細胞中的模式表明所述樣品中的λ限制性。

14.根據權利要求7-11中任一項所述的方法，其中，單獨的B細胞中與雜交的IGKCR探針有關的信號和與雜交的IGLCR探針有關的信號兩者的模式表明所述樣品是多克隆的。

15.根據權利要求7-11中任一項所述的方法，其中，相同B細胞中與雜交的IGKCR探針有關的信號和與雜交的IGLCR探針有關的信號兩者的模式表明所述樣品是單克隆的。

16.根據權利要求7-11中任一項所述的方法，其中，在相同B細胞中存在與IGKCR探針有關的信號和與IGLCR探針有關的信號兩者，并且其中與雜交的IGLL5探針有關的信號水平大于或等于與雜交的IGLCR探針有關的信號水平的模式表明了κ限制性。