[發(fā)明專利]通過RNA原位雜交檢測免疫球蛋白輕鏈限制性在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201380029752.4 | 申請日： | 2013-04-05 |
| 公開（公告）號： | CN104619859A | 公開（公告）日： | 2015-05-13 |
| 發(fā)明（設計）人： | 馬小駿;羅宇齡;雷蒙德·塔布斯 | 申請（專利權(quán)）人： | 領先細胞醫(yī)療診斷有限公司;克里夫蘭診所基金會 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京安信方達知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11262 | 代理人： | 王思琪;鄭霞 |
| 地址： | 美國加利*** | 國省代碼： | 美國;US |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 通過 rna 原位雜交 檢測 免疫球蛋白 限制性 | ||
1.用于檢測B細胞中免疫球蛋白輕鏈限制性和克隆性的方法，所述方法包括：
(a)從受試者獲得B細胞樣品；
(b)利用(i)設計為特異性雜交至免疫球蛋白κ鏈恒定區(qū)(IGKCR)RNA的至少一種探針組；和(ii)設計為特異性雜交至免疫球蛋白λ鏈恒定區(qū)(IGLCR)RNA的至少一種探針組對所述樣品進行雙重原位雜交測定；
(c)檢測所述樣品中B細胞群體中與雜交的IGKCR探針有關的信號和與雜交的IGLCR探針有關的信號；和
(d)確定所述B細胞群體中單個細胞內(nèi)與雜交的IGKCR探針和雜交的IGLCR探針有關的信號模式，其中單個細胞中的信號模式表明存在或不存在所述B細胞的輕鏈限制性和克隆性。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，僅有與雜交的IGKCR探針有關的信號的個體B細胞中的模式表明樣品中的κ限制性。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，僅有與雜交的IGLCR探針有關的信號的個體B細胞中的模式表明樣品中的λ限制性。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，相同B細胞中與雜交的IGKCR探針有關的信號和與雜交的IGLCR探針有關的信號兩者的模式表明所述樣品是單克隆的。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述群體內(nèi)單獨B細胞中與雜交的IGKCR探針有關的信號和與雜交的IGLCR探針有關的信號兩者的模式表明所述樣品是多克隆的。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項所述的方法，其中，所述受試者是人。
7.用于檢測B細胞中免疫球蛋白輕鏈限制性和克隆性的方法，所述方法包括：
(a)從受試者獲得B細胞樣品；
(b)利用(i)設計為特異性雜交至免疫球蛋白κ鏈恒定區(qū)(IGKCR)RNA的至少一種探針組；(ii)設計為特異性雜交至免疫球蛋白λ鏈恒定區(qū)(IGLCR)RNA的至少一種探針組；和(iii)設計為特異性雜交至免疫球蛋白λ樣多肽5(IGLL5)RNA的至少一種探針組對所述樣品進行一種或多種原位雜交測定；
(c)檢測所述樣品中B細胞群體中與雜交的IGKCR探針有關的信號，與雜交的IGLCR探針有關的信號、和與雜交的IGLL5探針有關的信號；和
(d)確定所述B細胞群體中單個細胞內(nèi)與雜交的IGKCR探針、雜交的IGLCR探針和雜交的IGLL5探針有關的信號的模式，其中所述單個細胞中的信號模式表明存在或不存在所述B細胞的輕鏈限制性和克隆性。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中，作為單重反應在連續(xù)切片上進行一個或多個原位雜交測定。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中，所述IGKCR探針組和IGLCR探針組在相同原位雜交測定中雜交。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中，IGLL5探針組的雜交是處于其中IGKCR探針組和IGLCR探針組被雜交的測定中的單獨原位雜交測定中。
11.根據(jù)權(quán)利要求7-10中任一項所述的方法，還包括使用至少一種陰性對照探針組。
12.根據(jù)權(quán)利要求7-11中任一項所述的方法，其中，僅具有與雜交的IGKCR探針有關的信號的個體B細胞中的模式表明所述樣品中的κ限制性。
13.根據(jù)權(quán)利要求7-11中任一項所述的方法，其中，僅具有與雜交的IGLCR探針有關的信號的個體B細胞中的模式表明所述樣品中的λ限制性。
14.根據(jù)權(quán)利要求7-11中任一項所述的方法，其中，單獨的B細胞中與雜交的IGKCR探針有關的信號和與雜交的IGLCR探針有關的信號兩者的模式表明所述樣品是多克隆的。
15.根據(jù)權(quán)利要求7-11中任一項所述的方法，其中，相同B細胞中與雜交的IGKCR探針有關的信號和與雜交的IGLCR探針有關的信號兩者的模式表明所述樣品是單克隆的。
16.根據(jù)權(quán)利要求7-11中任一項所述的方法，其中，在相同B細胞中存在與IGKCR探針有關的信號和與IGLCR探針有關的信號兩者，并且其中與雜交的IGLL5探針有關的信號水平大于或等于與雜交的IGLCR探針有關的信號水平的模式表明了κ限制性。
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