[發明專利]免疫抑制細胞及其制造和使用方法

有效

• 申請號: 201380029683.7
• 申請日: 2013-06-04
• 公開（公告）號: CN104955941B
• 公開（公告）日: 2019-03-26
• 發明（設計）人: 許素菁;陳信偉;莊再成;陳欣瑜;王麗姿
• 申請（專利權）人: 財團法人衛生研究院
• 主分類號: C12N5/0784
• 分類號: C12N5/0784;A61K35/15;A61K35/28;A61P37/06;C12N5/078
• 代理公司: 北京中博世達專利商標代理有限公司 11274
• 代理人: 申健

本發明涉及一種免疫抑制細胞及其制造和使用方法。所述免疫抑制細胞通過將一前驅細胞培養于含有GRO趨化激素之培養基中而得到。

【相關申請】

本申請要求申請日為2012年6月4日的美國臨時申請No.61/655,191的優先權，該申請的全部內容以引用方式全部合并于此。

【先前技術】

髓源性抑制細胞(MDSCs)是一群包含有早期髓系前驅細胞/粒細胞異質群體、巨噬細胞和樹突狀細胞等異細胞亞群的集合體。這些細胞通常由髓系標記Gr-1和CD11b表現其特征。髓源性抑制細胞由于可藉由增加免疫抑制因子，例如精氨酸酶1(ARG-1)和一氧化氮合酶2(NOS2)之表現來抑制T細胞效應之功能，而在腫瘤免疫逃逸機制、自體免疫疾病、移植排斥反應，慢性炎癥及感染等方面扮演重要角色。參見(例如)，Gabrilovich與Nagaraj,NatRev Immunol 9:162-174(2009)。

由于髓源性抑制細胞所具有之免疫抑制特性，而使其能做為治療免疫性疾病的候選藥物。因此，亟需一種藉由得自活體培養方式產生之穩定且安全的髓源性抑制細胞。

【發明內容】

本發明基于此發現，生長調節致癌基因(GRO)趨化激素，尤其是GRO-γ，對于人類周邊血單核細胞衍生的樹突狀細胞(MDDCs)之分化及功能具有抑制作用。此外，發現GRO-γ可驅動MDDCs分化成為一種類似髓源性抑制細胞(MDSC)的表現型。

因此，本發明所描述系關于一種獲得免疫抑制細胞的方法。該方法包括：獲得一種能分化成樹突狀細胞之前驅細胞；及將該前驅細胞培養于含有一趨化激素之培養基中一段足夠使該前驅細胞分化為樹突狀細胞的時間，其中該樹突狀細胞系呈現一種免疫抑制表型，而藉此獲得該免疫抑制細胞。所述之趨化激素可為一種GRO趨化激素，例如，GRO-γ或GRO-α。

另一方面，本發明包含一種藉由上述方法得到之免疫抑制細胞，及含有該細胞的組成物。

本發明亦描述一種使用上述細胞或細胞組成物治療個體中各種病況之方法。例如，本發明之細胞或細胞組成物可用于有需要之個體中抑制免疫反應，調節與腫瘤發生相關之血管新生，治療自身免疫疾病，治療發炎性疾病，或治療移植物對抗宿主疾病(GVHD)。

【圖式簡單說明】

圖1表示間葉系干細胞(MSC)-條件培養基對于MDDC分化產生了抑制效果。將純化來自人類PBMCS的CD14⁺單核細胞培養在有或無MSC-條件培養基(MSC-CM)(1/2X體積)存在下培養于DC-分化培養基中。于第5天iDC再經無或以LPS(1mg/mL)處理(mDC)兩天。于第7天分析MDDCs的表型和功能。(A)針對與DC成熟相關之表面標記進行染色，并以流式細胞儀分析，測定10,000個細胞的平均熒光強度(MFI)。(B)未成熟之MDDCs以熒光標記葡聚糖試劑(1mg/mL)于37℃下施予脈沖30分鐘，并藉由以流式細胞儀測量之FITC-葡聚醣攝取量分析其內吞能力。所顯示于FITC-葡聚醣攝入后之FACS圖譜為：無FTIC-葡聚醣存在下的MDDCs作為陰性對照組(NC，灰線)，iMDDCs(iDC，虛線)，及有MSC-CM存在下之iMDDCs具(iDC+MSC-CM，黑色實線)。數據為于2位供者進行之三次獨立實驗的代表性結果。(C)成熟MDDCs與同種異體之T細胞共培養4天(DC：T＝1:10)，并于以1μCi/孔之[³H]-胸苷施予脈沖16小時后測量定與胸苷的并入量。藉由于三名供者各重復三次所測得之[³H]-胸苷并入量來測定T細胞增生。數據以相對于無MSC-CM補充組之倍數(MFI±SD)，或以[³H]-胸苷攝取量之CPM(平均值±SD)表示。數據代表三次獨立實驗之結果。(n＝3位供者，每次實驗)。*：p<0.05；**：p<0.01；***：p<0.0001。