[發明專利]生產型細胞系的增強子

有效

• 申請號: 201380028164.9
• 申請日: 2013-05-29
• 公開（公告）號: CN104350068B
• 公開（公告）日: 2019-12-03
• 發明（設計）人: 陳剛;D·布拉科夫;D·德施潘德
• 申請（專利權）人: 瑞澤恩制藥公司
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00;C12N15/79
• 代理公司: 11038 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所
• 代理人: 袁泉<國際申請>=PCT/US2013/

1.一種細胞，其包含：

(a)編碼并異位表達內質網降解增強α-甘露糖苷酶-樣蛋白質2(EDEM2)的重組多核苷酸，其中所述的EDEM2由選自SEQ ID NO:1～6的氨基酸序列之一組成；和

(b)編碼多亞基蛋白質的多核苷酸。

2.權利要求1所述的細胞，其中所述的多亞基蛋白質為抗體。

3.權利要求2所述的細胞，其中所述的抗體包含如下氨基酸序列：

(a)SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:21；

(b)SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:22；

(c)SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:29；

(d)SEQ ID NO:28和SEQ ID NO:30；

(e)SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:37；或

(f)SEQ ID NO:36和SEQ ID NO:38。

4.權利要求1所述的細胞，其中

(a)所述細胞還包含編碼剪切形式的XBP-1的多核苷酸；和/或

(b)所述的細胞為哺乳動物的細胞。

5.權利要求1所述的細胞，其中所述的細胞為中國倉鼠卵巢(CHO)細胞。

6.權利要求4所述的細胞，其中所述的XBP-1由選自下述的氨基酸序列之一組成：SEQID NO:9、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11。

7.一種由權利要求1～6的任意一項所述的細胞衍生得到的細胞系，其中所述細胞系：

(a)生產效價為至少3g/L的所述的蛋白質；和

(b)與不包含所述的編碼EDEM2的重組多核苷酸的細胞系的積分細胞密度相比，具有高出至少30％的積分細胞密度。

8.權利要求7所述的細胞系，其中所述細胞系生產效價為至少5g/L的所述的蛋白質。

9.權利要求7所述的細胞系，其中所述細胞系生產效價為至少8g/L的所述的蛋白質。

10.一種包含編碼EDEM2蛋白質和XBP-1蛋白質的核苷酸序列的重組多核苷酸，與啟動子可操作地連接，其中：

(a)所述的EDEM2蛋白質由選自SEQ ID NO:1～6的氨基酸序列之一組成；和

(b)所述的XBP-1蛋白質選自小鼠XBP-1、倉鼠XBP-1或人XBP-1。

11.權利要求10所述的重組多核苷酸，其中所述的啟動子選自哺乳動物的泛素C啟動子、SV40啟動子和CMV-IE啟動子。

12.權利要求10所述的重組多核苷酸，其中

編碼所述EDEM2蛋白質的多核苷酸由SEQ ID NO:16的核苷酸序列組成，并且

編碼所述Xbp-1蛋白質的多核苷酸由SEQ ID NO:18的核苷酸序列組成。

13.權利要求10～12的任意一項所述的重組多核苷酸，其還包含編碼抗GDF8抗體重鏈和輕鏈的核苷酸序列。

14.權利要求13所述的重組多核苷酸，其中

(a)所述的抗GDF8抗體重鏈

由SEQ ID NO:20的氨基酸序列組成，或者

由SEQ ID NO:19的氨基酸序列組成；或者

(b)所述的編碼抗GDF8抗體重鏈的多核苷酸

由SEQ ID NO:23的核苷酸序列組成，或者

由SEQ ID NO:24的核苷酸序列組成。