[發明專利]雙阿司匹林交聯聚乙二醇化血紅蛋白

在審

• 申請號: 201380027621.2
• 申請日: 2013-03-15
• 公開（公告）號: CN104379160A
• 公開（公告）日: 2015-02-25
• 發明（設計）人: K·D·范德格里夫;A·馬拉瓦爾立;S·D·奧爾森
• 申請（專利權）人: 桑加特公司
• 主分類號: A61K38/42
• 分類號: A61K38/42;A61K47/48;A61P7/06;A61P1/16;A61P17/02;A61P11/00;A61P9/10;A61P9/14;A61P27/02;A61P9/02;A61P25/00
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 賈士聰;黃革生

發明領域

本發明大體上涉及用于在微血管系統中與天然血紅蛋白相比以提高的速率將亞硝酸鹽還原為氧化氮的交聯聚乙二醇化血紅蛋白和血紅蛋白組合物。具體地說，本發明是針對使用具有提高的亞硝酸鹽還原酶活性并且還可以將氧、一氧化碳、氧化氮或其混合物遞送到組織中的高氧親和力分子內交聯聚乙二醇化血紅蛋白綴合物。

發明背景

基于血紅蛋白的氧載體(“HBOC”)一直被與血管收縮相聯系，所述血管收縮已被歸因于血紅素對氧化氮(NO)的清除作用。適合作為氧治療劑的氧載體(有時稱為“攜帶氧的血漿容量擴張劑”)(諸如穩定化血紅蛋白(Hb))已顯示具有有限的功效，因為其清除氧化氮，從而引起血管收縮和高血壓。這些攜帶氧的解決方案引起血管收縮的傾向可在動物和人類中顯現為高血壓。盡管HBOC的血管收縮作用的潛在機制尚未充分了解，但已表明血紅素鐵可快速并且不可逆地與內源性NO(一種強大的血管擴張劑)組合，從而引起血管收縮。

部分因為這些血管收縮作用，迄今為止尚無氧載體作為氧治療劑(OTA)完全成功，不過包含修飾型無細胞Hb的產品已成為最有前景的產品。美國軍隊研發了用雙二溴水楊基-富馬酸酯的α鏈間交聯的人Hb(ααHb)作為原型紅細胞替代物，但在其展現肺及全身血管阻力劇烈增加之后被放棄(Hess，J.等，1991，Blood?78：356A)。此產品的商業形式在令人失望的III期臨床試驗之后也被放棄(Winslow，R.M.，2000，Vox?Sang?79：1-20)。

已提出兩種分子途徑，試圖克服Hb的NO結合活性。第一種途徑使用遠端血紅素口袋的定位誘變，以求形成NO結合親和力降低的重組血紅蛋白(Eich，R.F.等，1996，35：6976-83)。第二種途徑使用化學修飾途徑，其中通過寡聚化增加Hb的大小，以求降低或有可能完全抑制Hb從血管間隔中溢出進入胞間隙(Hess，J.R.等，1978，J.Appl.Physiol.74：1769-78；Muldoon，S.M.等，1996，J.Lab.Clin.Med.128：579-83；Macdonald，V.W.等，1994，Biotechnology?22：565-75；Furchgott，R.，1984，Ann.Rev.Pharmacol.24：175-97；以及Kilbourne，R.等，1994，Biochem.Biophys.Res.Commun.199：155-62)。

事實上，已產生對NO的關聯結合速率降低的重組Hb，其在最大負荷大鼠實驗中更少產生高血壓(Doherty，D.H.等1998，Nature?Biotechnology?16：672-676以及Lemon，D.D.等1996，Biotech?24：378)。然而，研究表明NO結合可能不是Hb的血管活性的唯一解釋。已發現某些大Hb分子(諸如用聚乙二醇(PEG)修飾的大Hb分子)實際上無血管收縮，盡管其NO締合速率與嚴重高血壓ααHb的NO締合速率目同(Rohlfs，R.J.等1998，J?Biol.Chem.273：12128-12134)。此外，發現當在出血之前作為交換輸血提供時PEG-Hb預防出血結果格外有效(Winslow，R.M.等1998，J.Appl.Physiol.85：993-1003)。

PEG綴合至Hb使其抗原性降低并且延長其循環半衰期。然而，已報導PEG綴合反應引起Hb四聚體解離成αβ-二聚體亞基，從而在接受低于40，000道爾頓(“Da”)的Hb單體單元的PEG-綴合物的交換輸血大鼠中引起嚴重的血紅蛋白尿(Iwashita和Ajisaka?Organ-Directed?Toxicity：Chem.Indicies?Mech.，Proc.Symp.，Brown等1981，編著Pergamon，Oxford，England第97-101頁)。分子量大于84，000道爾頓的聚環氧烷(“PAO”)綴合Hb是由Enzon，Inc.(美國專利號5，650，388)制備，其攜帶約10個拷貝的在α和ε氨基處鍵聯至Hb的PEG-5,000鏈。此取代度描述為避免在哺乳動物中與血紅蛋白尿有關的臨床上顯著的腎毒性。然而，綴合反應產生異質綴合群體并且含有其它不合需要的反應物，其必須通過柱色譜法去除。