[發(fā)明專利]用于治療疼痛和COPD的極性糖脂的混合物在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201380026466.2 | 申請日： | 2013-03-13 |
| 公開（公告）號： | CN104321066A | 公開（公告）日： | 2015-01-28 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | T·克洛西;F·瓜格尼尼;E·扎里尼 | 申請（專利權(quán)）人： | 賽諾菲 |
| 主分類號： | A61K35/748 | 分類號： | A61K35/748;A61K31/739;C08B37/00;C12P19/04;A61P29/00;A61P11/00;C12R1/89 |
| 代理公司： | 北京市嘉元知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11484 | 代理人： | 陳靜 |
| 地址： | 法國*** | 國省代碼： | 法國;FR |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 用于 治療 疼痛 copd 極性 糖脂 混合物 | ||
1.一種包含極性糖脂的組合物，所述極性糖脂可從藍細菌顫藍細菌屬菌種(cyanobacterium?Oscillatoria?species,CyP)的細胞獲得，所述組合物用于治療和/或預(yù)防疼痛和/或慢性阻塞性肺疾病(Chronic?Obstructive?Pulmonary?Disease,COPD)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的用于所述用途的組合物，其中所述極性糖脂是脂多糖(LPS)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的用于所述用途的組合物，其中所述極性糖脂是從藍細菌顫藍細菌屬菌種中提取的。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項的用于所述用途的組合物，其中所述極性糖脂可從藍細菌顫藍細菌屬菌種通過如下方法獲得，所述方法包括：
(a)提供所述藍細菌；
(b)從所述藍細菌提取極性糖脂；
(c)沉淀步驟(b)的極性糖脂；并且
(d)純化步驟(c)的經(jīng)提取并沉淀的極性糖脂。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的用于所述用途的組合物，其中步驟(b)包括用包含促溶劑和非質(zhì)子有機溶劑如氯仿的變性溶液的處理。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項的用于所述用途的組合物，其中所述方法包括如下步驟：
(i)提供藍細菌的濃縮物，如通過離心從培養(yǎng)基收集藍細菌后獲取的經(jīng)冷凍干燥的濃縮物；
(ii)將所述濃縮物懸浮于溶液中；
(iii)任選地用微波和/或液體/固體分離如通過離心處理，并收集液相(稱為上清)；
(iv)將藍細菌的懸浮液或所述上清與包含促溶劑和非質(zhì)子有機溶劑如氯仿的變性溶液混合；
(v)將步驟(iv)獲得的溶液進行溫育；
(vi)進行液體/液體分離，優(yōu)選通過離心并收集水性液相；
(vii)沉淀糖脂級分，例如通過向所述上清添加鹽和有機溶劑如丙酮；
(viii)將沉淀物重懸于水溶液中；
(ix)任選地用有機溶劑如異丙醇來處理在(viii)獲得的溶液，離心，并收集液相，優(yōu)選通過離心進行；并且
(x)通過離子交換柱并收集包含所述極性糖脂的級分。
7.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項的用于所述用途的組合物，其中所述極性糖脂可從藍細菌顫藍細菌屬菌種通過如下方法獲得，所述方法包括用變性促溶劑提取，用核酸酶處理所述提取物直到核酸污染水平低于或等于總重量的5％，在截留為30KDa的設(shè)備上進行分子分離，然后是回收更高分子量的級分。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的用于所述用途的包含極性糖脂的組合物，其可從藍細菌顫藍細菌屬菌種的細胞通過包括用變性促溶劑提取的方法來獲得，其中所述提取步驟是如下述步驟(b)所述進行，核酸酶處理是如下述步驟(g)所述進行，分子分離是如下述步驟(k)所述進行，并包括進一步的下述步驟(a)、(c)-(f)、(h)-(j)和(l)-(m)：
(a)用水溶液懸浮藍細菌顫藍細菌屬菌種的濃縮物，任選地為冷凍干燥濃縮物，其體積比優(yōu)選包含1:1-1:2；
(b)將藍細菌的懸浮物與2-4體積(優(yōu)選約3體積)的變性溶液進行混合，所述變性溶液包含促溶劑、極性質(zhì)子有機溶劑(優(yōu)選苯酚)、以及非質(zhì)子有機溶劑如氯仿；
(c)溫育短于60分鐘的時間；
(d)離心并收集液相，稱為上清；
(e)通過向所述上清添加鹽和有機溶劑(優(yōu)選丙酮)來沉淀糖脂級分，并用水稀釋過的乙醇來洗滌沉淀物(或沉淀)；
(f)將沉淀重懸于水溶液中，優(yōu)選緩沖的水溶液；
(g)用核酸酶處理，優(yōu)選內(nèi)切核酸酶和/或外切核酸酶，并且隨后用蛋白酶，優(yōu)選蛋白酶K處理；
(h)通過添加鹽和有機溶劑，優(yōu)選丙酮來沉淀糖脂相；
(i)任選地用水稀釋過的乙醇來洗滌沉淀，并重懸于包含離子表面活性劑，優(yōu)選脫氧膽酸鈉，以及季銨鹽的水溶液中；
(j)如步驟(b)-(f)所述從所述水溶液中重新提取；
(k)在截留為30KDa的設(shè)備上進行分子分離；
(l)用水或緩沖的水溶液來回收高分子量極性糖脂級分并評估核酸或蛋白質(zhì)污染的水平；
(m)回收并使用具有低于總重量5％的核酸污染的級分。
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