[發明專利]失活和提取耐酸細菌以用于使用質譜分析法表征和/或鑒定的方法

在審

• 申請號: 201380025243.4
• 申請日: 2013-05-15
• 公開（公告）號: CN104284985A
• 公開（公告）日: 2015-01-14
• 發明（設計）人: 瓊斯·M·海曼;帕拉姆帕爾·多爾;伊麗莎白·米勒;維多利亞·吉拉德;安布爾·蓋茨;桑德琳·麥勒;莫德·阿爾薩克;約翰·沃爾什
• 申請（專利權）人: 生物梅里埃有限公司
• 主分類號: C12Q1/24
• 分類號: C12Q1/24;G01N33/569;G01N33/68
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262
• 代理人: 王思琪;鄭霞

1.一種用于失活和提取測試樣品中的耐酸細菌的方法，所述方法包括以下連續步驟：

(a)從已知包含或可能包含耐酸細菌的固體或半固體培養基中獲得測試樣品，并將所述測試樣品懸浮于包含乙醇和珠的容器中；

(b)珠磨和/或渦旋所述容器以打碎所述容器中的團塊和/或破壞所述容器中的耐酸細菌細胞；以及

(c)隨后在室溫下溫育所述懸浮液至少約5分鐘，以失活所述測試樣品中包含的任何分支桿菌(mycobacteria)。

2.如權利要求1所述的方法，其中所述方法還包括以下另外的連續步驟：

(d)離心所述容器以沉淀所述耐酸細菌樣品并除去所述上清液；

(e)重懸耐酸細菌沉淀于甲酸中；以及

(f)隨后將乙腈加入至所述容器中。

3.如任何前述權利要求所述的方法，其中所述方法還包括以下另外的連續步驟：

(g)將來自步驟(f)的上清液的等分試樣轉移至質譜分析法的靶載玻片并將基質溶液加入至所述上清液；以及

(h)通過質譜分析法詢問所述載玻片或板上的測試樣品以獲得所述耐酸細菌的一種或更多種質譜，并且通過將所測量的一種或更多種質譜與一種或更多種參考質譜比較來表征和/或鑒定所述測試樣品中的所述耐酸細菌。

4.如任何前述權利要求所述的方法，其中所述耐酸細菌為分枝桿菌屬(Mycobacteria)或諾卡氏菌屬(Nocardia)。

5.如權利要求2-4所述的方法，其中將來自步驟(d)的上清液直接或作為水懸浮液，應用至質譜分析法的載玻片或板。

6.如任何前述權利要求中所述的方法，其中所述容器包含70％乙醇。

7.如任何前述權利要求所述的方法，其中所述珠是0.5mm玻璃珠。

8.如權利要求2-8中所述的方法，其中將步驟(d)中的沉淀重懸于70％甲酸中。

9.如權利要求2-8中所述的方法，其中加入乙腈至從約35％至約65％的終濃度。

10.如任何前述權利要求所述的方法，其中所述方法還包括珠磨或渦旋步驟(b)中的容器約1分鐘至約30分鐘。

11.如任何前述權利要求所述的方法，其中所述方法還包括溫育步驟(c)中的懸浮液至少約5分鐘。

12.如任何前述權利要求所述的方法，其中所述方法還包括溫育步驟(c)中的懸浮液至少約10分鐘。

13.如權利要求2-12所述的方法，其中在步驟(e)中將所述沉淀重懸于至少約3μL的甲酸中。

14.如權利要求2-12所述的方法，其中在步驟(f)中將至少約3μL乙腈加入至重懸的沉淀。

15.如任何前述權利要求中所述的方法，其中所述方法還包括在步驟(f)之后離心所述容器中的測試樣品。

16.如權利要求3-15中所述的方法，其中步驟(g)包括將所述測試樣品的等分試樣轉移至質譜分析法的載玻片或板，允許所述等分試樣干燥并隨后加入基質。

17.如權利要求3-16中所述的方法，其中所述基質是α-氰基-4-羥基肉桂酸(CHCA)。

18.如權利要求3-16中所述的方法，其中將所述耐酸細菌鑒定至屬、種和/或菌株水平。